在磷酸化蛋白流式检测中，固定和破膜是必不可少的步骤，但它们常常严重影响表面标记物的荧光强度，导致细胞群体无法准确区分。如何在保证磷酸化蛋白检测质量的同时，最大程度保留表面标记物的强度？

为什么固定和破膜会影响表面标记物？
- 甲醛固定和甲醇/皂苷破膜会改变细胞膜结构，导致抗体结合位点暴露或掩盖。
- 破膜后，非特异性结合增加，背景荧光升高，降低信噪比。
- 部分表面标记物在细胞内也有表达，破膜后抗体会结合内部抗原，导致假阳性。

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