凋亡流式细胞分群不明显

小胖纸

刚做的巨噬细胞凋亡流式检测，用BD的 FITC-Annexin V 盒子，结果细胞分群不明显，重复了好多次了，都是这个鬼样子，求大神帮忙解答。https://www.flowcyto.cn/bbs/forum.php?mod=attachment&aid=OTgwMHxhNDVhZmMwNHwxNzE4MTA1MDE1fDB8

niwanmao

小胖纸 发表于 2016-5-9 21:37
ni大神的意思是右下角并不是早期凋亡，而是由于活细胞发生荧光偏移的结果吗？还有，图中的十字门是根据空白 ...

空白对照本身就不是良好的流式对照，空白对照用途其实就是用于确定电压是否合适。所以在空白的基础上，调节门的位置是非常正常的，更不用说你的实验结果分群这么好，发表文章只要是懂流式的人，不会质疑，如果质疑，我们帮你应战。

niwanmao

其实你的结果分群很好啊，只是有些图形可以用十字门，有些图形由于活细胞发生荧光偏移，需要用特殊的十字门，见下面两幅代表性的图（蓝色的粗线是我画的示意门）：

小胖纸

ni大神的意思是右下角并不是早期凋亡，而是由于活细胞发生荧光偏移的结果吗？还有，图中的十字门是根据空白对照画的，能再自行调整门吗？

小胖纸

niwanmao 发表于 2016-5-9 22:11
空白对照本身就不是良好的流式对照，空白对照用途其实就是用于确定电压是否合适。所以在空白的基础上，调 ...

谢谢ni大神的鼎力支持，我是用双氧水诱导正常的巨噬细胞凋亡，主要是用凋亡细胞进行后续实验，因此目的：一是看凋亡率，二是主要侧重于早期凋亡。分群在右上角的有人认为是晚凋，有人认为是晚凋+死亡，没有确切的定论。所以请经验丰富的ni大神分析一下：1、计算凋亡率可否把右上和右下相加；2、诱导细胞早凋有何注意事项。

niwanmao

小胖纸 发表于 2016-5-10 09:28
谢谢ni大神的鼎力支持，我是用双氧水诱导正常的巨噬细胞凋亡，主要是用凋亡细胞进行后续实验，因此目的： ...

右上的可能没法算凋亡，其实晚期凋亡已经跟坏死特性差不多了。我在想，你是不是可以在双氧水的量、作用时间上想想办法。

小胖纸

niwanmao 发表于 2016-5-10 10:42
右上的可能没法算凋亡，其实晚期凋亡已经跟坏死特性差不多了。我在想，你是不是可以在双氧水的量、作用时 ...

谢大神！继续摸索

小憨

小胖纸 发表于 2016-5-9 21:37
ni大神的意思是右下角并不是早期凋亡，而是由于活细胞发生荧光偏移的结果吗？还有，图中的十字门是根据空白 ...

其实我也有这样的疑惑的，我的文章给我的老师修改的时候他就跟我说要把门的位置调整一样的，后来我看了看文献确实几乎所有文献上的流式图，其门的位置都是一样的，所以我再分析数据的时候都有点儿强迫症了，不断的调整门的位置，直到一个所有样品都能勉强分群……

bernie1023

检测凋亡的时候，有时候染色的样本确实会发生偏移，这时需要调整十字门的位置，而不是用空白对照时设的十字门，十字门有时候需要特殊处理，正如倪老师所说的。分群不是很清楚的话，可以改为等高图，比散点图更容易区分分群。

小胖纸

bernie1023 发表于 2016-5-11 12:53
检测凋亡的时候，有时候染色的样本确实会发生偏移，这时需要调整十字门的位置，而不是用空白对照时设的十字 ...

是的，附件中文章（IF还是蛮高的）中的十字门划分细胞分群有些并不明显，挺让人费解的。能解答一下吗？

https://www.flowcyto.cn/bbs/forum.php?mod=attachment&aid=OTg1M3xmNTcxMzE0N3wxNzE4MTA1MDE1fDB8