请教T细胞破膜加蛋白转运抑制剂的问题

面团胖宝宝 · 发表于 2022-10-18 01:32:51

请教各位大神！

我是要破膜测CD8+T细胞内的穿孔素和颗粒酶，之前用的stemcell的cd3/cd28激活剂激活细胞48h后提取上清用ELISA检测这两个指标（对照组和实验组差异很大）
现在要破膜做流式，买的BD GolgiPlug™（含布雷菲德菌素 A）蛋白转运抑制剂，可是这个抑制剂说明书写的是在培养基中不应超过 12小时，但是我又必须等T细胞激活48h后再测，请问这该如何是好呢？

niwanmao · 发表于 2022-10-18 07:30:09

一般刺激4~6小时即可，为什么你要刺激48小时呢？

面团胖宝宝 · 发表于 2022-10-18 12:05:20

niwanmao 发表于 2022-10-18 07:30
一般刺激4~6小时即可，为什么你要刺激48小时呢？

之前问的stemcell的技术，他说这个激活剂一般激活48-72h，另外我还要加药物干预也是干预的48h

Climber · 发表于 2022-10-18 15:18:13

还有一招就是在CD3 CD28刺激48小时后直接在培养基加BFA

Climber · 发表于 2022-10-18 15:19:30

另外如倪老师所说，一般情况用PMA-lynomycin或者CD3 CD28 4h就可以检测到穿孔素和颗粒酶

Climber · 发表于 2022-10-18 15:20:29

Climber 发表于 2022-10-18 15:18
还有一招就是在CD3 CD28刺激48小时后直接在培养基加BFA

也可以说在剩余刺激时间的最后4h加入BFA

面团胖宝宝 · 发表于 2022-10-18 21:33:57

Climber 发表于 2022-10-18 15:20
也可以说在剩余刺激时间的最后4h加入BFA

相当于我在44h的时候加入BFA，继续培养4h，然后制样上机测流式？

Climber · 发表于 2022-10-21 16:34:19

面团胖宝宝发表于 2022-10-18 21:33
相当于我在44h的时候加入BFA，继续培养4h，然后制样上机测流式？

是的，这样子也是可以的

面团胖宝宝 · 发表于 2022-10-31 10:55:30

Climber 发表于 2022-10-21 16:34
是的，这样子也是可以的

明白拉~谢谢您

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[淋巴细胞相关] 请教T细胞破膜加蛋白转运抑制剂的问题