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[淋巴细胞相关] 流式图分析问题

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发表于 2023-8-17 17:31:26 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏1流星未解决
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如图,纵轴是CD127,横轴是CD90,这是补偿调节后的图,在相同补偿下,大部分样本与左图一致,两三个样本与右图一致,请问各位老师,右图这种属于什么情况,是什么原因导致?

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 楼主| 发表于 2023-8-17 17:32:10 | 显示全部楼层
左图即上图,右图即下图
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发表于 2023-8-17 18:43:12 | 显示全部楼层
看起来像补偿没调好,你的左、右图里不止一种荧光素的含量/强度应该是存在较大差异的,可以把其他荧光素分别和横纵轴组合一下试试看,看看哪个偏得最厉害,再去手动改改补偿试试看
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发表于 2023-8-17 21:53:35 | 显示全部楼层
同样的抗体、同样的补偿,不应该这样的差异。

不知道大部分指的是多少个样本?从数据量来看,上图是更可靠一些,下图事件数如此之少,很可能是存在问题的。
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 楼主| 发表于 2023-8-17 22:38:45 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2023-8-17 21:53
同样的抗体、同样的补偿,不应该这样的差异。

不知道大部分指的是多少个样本?从数据量来看,上图是更可靠 ...

十个样本,有八个是上图,两个是下图,大概这种比例,一批实验一样的操作一样的分析,另外也出现过结果是上下图叠加的样本。是不是流式机器的问题,感觉像是数据记录过程出错?
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 楼主| 发表于 2023-8-17 22:40:59 | 显示全部楼层
zdvfsadb 发表于 2023-8-17 18:43
看起来像补偿没调好,你的左、右图里不止一种荧光素的含量/强度应该是存在较大差异的,可以把其他荧光素分 ...

和其他荧光素组合看了一下,其他补偿基本是对的,没有明显的偏移
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发表于 2023-8-18 07:31:39 | 显示全部楼层
Ren 发表于 2023-8-17 22:38
十个样本,有八个是上图,两个是下图,大概这种比例,一批实验一样的操作一样的分析,另外也出现过结果是 ...

如果有可能,建议放两个各自的典型FCS文件上来看看。流式细胞仪不可能出这样的问题,这样的话,这种仪器也太不稳定了。
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 楼主| 发表于 2023-8-18 10:27:01 | 显示全部楼层
可能还是补偿的问题?我又调了一下 8302ba41aad10192b64598532007ac0.png 73092fff56bb87492fde4ad4445c522.png
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发表于 2023-8-20 20:57:06 | 显示全部楼层
Ren 发表于 2023-8-18 10:27
可能还是补偿的问题?我又调了一下

下图是上图调节补偿后的图?这是单染CD90抗体的?如果是的话,下图中,CD90-和CD90+细胞在纵轴上比较一致,补偿感觉可以,但是直观看双阳的那一部分,再调节补偿应该是调不下来了,有排除非特异性信号吗?

你最开始发的下面那张图,应该是CD127-CD90,补偿减过了
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发表于 2023-8-20 21:01:23 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2023-8-18 07:31
如果有可能,建议放两个各自的典型FCS文件上来看看。流式细胞仪不可能出这样的问题,这样的话,这种仪器 ...

倪老师,如果是之前设置了一个电压条件,几天后,又设置了一个电压条件,一份新鲜的样本在旧的电压和新的电压条件下各测了一下,有些marker的百分比差异在5%,6%左右,这种情况也正常吧?

如果是仪器调节了光路,MFI会有些偏差,百分比理论上应该不会偏差很大吧?
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