人外周血细胞分群

mark

各位老师、同道们好：

• 人外周血裂红后的分析流程如图1，右侧是同型对照组，目的是分析淋巴细胞中CD6的表达情况，但很难分清图中各群细胞分别是什么，左下角圈出淋巴细胞后，对应的直方图并不是单个峰。（没有染细胞的表面标志物）
• 咨询过别人，说外周血做出来应该是如图2，考虑样本裂红时间太长，但是缩短裂红时间后数据结果没有太多变化。
• 想问一下各位老师同道：图1各群细胞可能是什么细胞？为什么细胞分群不是图2那样？图1 CD6直方图多个峰的原因是因为淋巴细胞圈门不对的问题吗？
  

niwanmao

你用的是什么裂解液配方？

mark

niwanmao 发表于 2024-12-5 22:23
你用的是什么裂解液配方？

买的现成的没有配置的，索莱宝R1010

三更灯火

细胞处理没问题的话，看起来就像是样本质量的问题了；另外缩短裂红时间是裂红多久，15min太长了

hexinying

加CD45有助于区分淋巴细胞，如果是样本状态不好的话，前侧向区分会有一定困难

mark

三更灯火 发表于 2024-12-6 08:43
细胞处理没问题的话，看起来就像是样本质量的问题了；另外缩短裂红时间是裂红多久，15min太长了 ...

缩短为5分钟，离心时间也缩短到5分钟左右

mark

hexinying 发表于 2024-12-6 09:44
加CD45有助于区分淋巴细胞，如果是样本状态不好的话，前侧向区分会有一定困难 ...

是的，没有染死活，没有染淋巴细胞的标志。

niwanmao

mark 发表于 2024-12-5 22:51
买的现成的没有配置的，索莱宝R1010

我倒是感觉可能是裂解液的问题

mark

niwanmao 发表于 2024-12-6 13:44
我倒是感觉可能是裂解液的问题

倪老师，我分析了几天，可能是电压设置的问题，FSC和SSC的坐标值都比较小，可能电压过大导致没收集到单核细胞和巨噬细胞，但是还有一个问题是edge上没有细胞events堆积，坐标轴边上不是一条线，不知道什么原因。

niwanmao

mark 发表于 2024-12-8 14:20
倪老师，我分析了几天，可能是电压设置的问题，FSC和SSC的坐标值都比较小，可能电压过大导致没收集到单核 ...

你的图里面，只有中性粒和淋巴，而单核不成群，缩到了碎片区域，这样的现象，就是裂解液的问题

但不一定说裂解液不好，有时候可能是裂解液不适合这台流式细胞仪，我们以前遇到过，经典的氯化铵裂解液在BD和Beckman仪器上分群很好，但在A公司的机器上始终就不好看