流式活死不分群

烟雨朦胧

请问各位老师，流式染了死活染料之后没有明显的分群，只是细胞群整体向右（阳性）偏移是什么原因呀，染料用的是TONBO的Ghost Dye Violet 510

niwanmao

烟雨朦胧 发表于 2025-4-28 09:25
好的老师，请问细胞活力不好的时候，就会出现死活不分群的情况吗？

全死、全活，两种混一起比较容易分

但现实状况，大多数情况还是存在将死未死的过渡状态，所以导致荧光呈现不明显分群，你可以利用死活染料+其它标记，结合起来看，不要只用FSC和SSC，这样可能更好找到最佳的分群位置

niwanmao

样本进行了什么处理？

很多死活染料，都有可能出现分群不明显，主要在于细胞状态

烟雨朦胧

niwanmao 发表于 2025-4-27 18:02
样本进行了什么处理？

很多死活染料，都有可能出现分群不明显，主要在于细胞状态 ...

老师，想请教一下细胞状态对死活染色有什么影响呢？
细胞是分化的原代小鼠BMDC，提出来就1x10^6/ml铺的24孔板，长着长着每孔中间都有一团肉眼可见的白色团块，显微镜下看长这样，团块有长的有圆的，铺板的时候还没有，长着长着就出来了，这种团块是什么东西呀
台盼蓝染色活率50%，培养基颜色正常放好几天都不带变色的，测支原体也是阴性
染色的时候就是染料1:1000稀释于PBS，4摄氏度染色20min

niwanmao

烟雨朦胧 发表于 2025-4-27 22:44
老师，想请教一下细胞状态对死活染色有什么影响呢？
细胞是分化的原代小鼠BMDC，提出来就1x10^6/ml铺的24 ...

台盼蓝50％，说明活力确实不好

增加换代频次是不是会好一点？

烟雨朦胧

niwanmao 发表于 2025-4-28 08:46
台盼蓝50％，说明活力确实不好

增加换代频次是不是会好一点？

好的老师，请问细胞活力不好的时候，就会出现死活不分群的情况吗？

烟雨朦胧

niwanmao 发表于 2025-4-28 11:24
全死、全活，两种混一起比较容易分

但现实状况，大多数情况还是存在将死未死的过渡状态，所以导致荧光呈 ...

噢噢，原来是这样！请问老师有没有推荐的死活染料+其它标记的搭配呀

niwanmao

烟雨朦胧 发表于 2025-4-28 18:18
噢噢，原来是这样！请问老师有没有推荐的死活染料+其它标记的搭配呀

你现在用的Ghost问题也不大呀，其它的是Live/dead最常用

主要是看你检测的细胞，搭配其系列特异性标记即可

烟雨朦胧

niwanmao 发表于 2025-4-28 21:17
你现在用的Ghost问题也不大呀，其它的是Live/dead最常用

主要是看你检测的细胞，搭配其系列特异性标记即 ...

好的，谢谢老师！