临床试验中高维流式细胞术（HDFCM）的挑战

niwanmao

1. 物流挑战
- 样本稳定性与处理  

• 临床样本（全血、组织活检、骨髓穿刺液、PBMC等）需在48–72小时内处理，具体取决于蛋白表达和细胞类型的稳定性。  
• 解决方案：使用稳定剂延长样本稳定性，或采用冷冻保存实现集中染色和数据采集，但需评估额外操作引入的变异风险。  
  

- 多中心试验的标准化挑战  

• 全球多中心试验中，样本处理、操作人员和仪器差异可能导致批次间变异。  
• 验证要求：需通过严格优化和验证流程（如批内/批间变异性、灵敏度、样本稳定性评估）确保数据可重复性。  
• 遵循ICSH、ICCS和CLSI的指南进行验证，即使探索性研究也建议进行基本验证（如变异性评估）。  
  

2. 临床试验中的HDFCM应用  
- 技术优势  

• 可同时检测多达50个参数，减少样本量和成本，支持跨研究的可比性（“一管多用”）。  
• 早期临床试验中用于探索疾病异质性和药物机制（MoA），后期转向靶向生物标志物检测。  
  

- 实施障碍  

• 开发周期长、成本高、需专业知识及复杂数据分析。  
• 光谱解混（Spectral Unmixing）受激光功率波动、检测器性能差异和低信噪比影响，需改进校准方法和试剂稳定性。  
  

3. 无监督数据分析的挑战  
手动设门 vs. 无监督分析  

• 手动设门仍是金标准，但无监督算法可发现新生物标志物。  
  

- 关键问题：  

• 聚类注释需标准化（如EuroFlow联盟的细胞标签体系）。  
• 批次效应影响分析，需通过参考样本（如Veri-Cells）和数据归一化（如CytoNorm）校正技术变异。  
  

- 监管要求：目前无监督分析仅用于探索性研究，需验证分析流程的重复性。  

4. CYTO 2024研讨会调研结果
- 参与者背景：34%来自制药企业，18%来自CRO，15%来自学术界。  
- HDFCM定义分歧：36%认为需>14参数，36%认为需>20参数，作者建议>12参数（基于仪器复杂性）。  
- 参与者最终选择低参数组合的原因：40%因“聚焦关键问题”，27%因“时间限制”。  
- 数据分析现状：47%仅用手动设门，53%结合手动与无监督分析。  



参考文献：Liechti T, Lelios I, Schroeder A, et al. Potential and challenges of clinical high-dimensional flow cytometry: A call to action [published correction appears in Cytometry A. 2025 Apr 18. doi: 10.1002/cyto.a.24936.]. Cytometry A. 2024;105(11):829-837. doi:10.1002/cyto.a.24902