流式中高度和面积到底指什么，一直搞不明白

Veblen

请问老师，学了这么久的流式，一直没把高度和面积参数搞明白；请老师解释一下，最好能易懂一些更好。
我先说一下自己的理解：高度是指细胞通过激光光斑时，比如光斑面积15x50um,细胞完全落在光斑里测得的信号；
而面积是对高度信号的积分，也就是细胞在接触激光到离开激光，对每时每刻测到的高度信号得到的积分。
我的问题是：
1. 我的理解正确吗？
2. 高度和面积信号如何换算？
3. 有时候听老师说A和H都可以分析，但是经常看到FSC-H/SSC-H 与FSC-A/SSC-A出来的细胞分群都有差异，甚至会出现用A来分析，多出细胞群体的现象，这又是为什么呢？
一直没弄清楚，请老师简答一下，感谢。

hurunhuan

1. 不是完全正确，细胞可能会比光斑宽，不能完全落在光斑里，所以H指的是波形的最高值。积分是看起来高大上的说法，实际上大部分厂家的计算过程就是把ADC（模数转换器，将模拟信号转化为数字信号）输出的数值简单相加，因为数学上这种加法是可以说成是积分的，所以这么描述是没有问题的。所以理论上ADC分辨率、频率越高，信号越精确。很多厂家宣传的是采用10-20MHz的ADC，有的厂家实际上底层固件只用了6.5MHz甚至更低的带宽。究极原因还是对于上样速度要求不高，如果是求函数的话，根据香农定律甚至只需要最大evens/s的2倍的采样频率就够了。所以，对于目前大部分流式的上样速度（例如极限速度100K evens/s）来说，最低5M Hz的ADC就远远够用了，ADC越好，相对信号越精确。。
2. 无法换算，H是电压，W是时间，A是测得的H相加的值（不同型号ADC、不同的分辨率、不同的时钟频率，都不一样），是无量纲数值。
3. A是完整的波形，H是最大值，所以理论上来说，A更能反映样本的情况。因为大部分客户追求A和H数值一致，所以大部分厂商会给计算出来的A值乘一个系数（比如BD的Area scaling），来达到跟H数值相同的目的。但是乘以系数的缺点是，不同的W（即不同大小的事件）需要乘的系数是不一致的，乘相同系数可能会导致通道的A/H图出现一些扭曲。
如果荧光通道的A和H通道的threshold（这个数值一般是固件自动设置，用户看不到，也不知道）不一样，那样扭曲的就更明显了。而且也会导致相同荧光通道A和H的补偿值无法共用。

图1： 不同分辨率和频率的ADC对相同波形的采集

图2：流式信号的 A H W