死活染料的补偿问题

正安

各位老师好
       打扰
       请问多色流式中死活染料是否需要调节补偿？用的新鲜人外周血 全血标本，死活染料选择为BD的Fixable Viability Stain系列。BD的老师说死活染料可以不调节补偿，自己不是很理解，不会有其他通道的光漏到死活染料所在通道及死活染料发光溢漏到其他通道吗？
       另外，这种胺类染料能否：先染其他表面markers，再裂红加固定，再染死活？因为目标细胞是中性粒细胞，先染死活时的处理步骤容易引起细胞损伤及早凋或者激活（有的文献表明离心就会引起中性粒细胞损伤）。
       谢谢！

niwanmao

补偿调节是需要的，尤其是跟其光谱有重叠的通道。

另外，不能先染其它Marker再染FVS，原因是中间的裂红、固定等步骤可能会影响膜的通透性，从而导致最后所有细胞都染上。 所以还是需要先染死活，后面处理步骤尽量减少损伤，例如降低离心力等

正安

谢谢倪老师指导