小鼠胃组织用流式看免疫细胞怎么消化比较好？

muxinru

各位老师好，我想用提小鼠胃组织的单细胞，percoll后取免疫细胞分析，但是数量太少了，想问问有没有大佬也做这个方面的？我用的sigma的胶原酶1，0.5mg/ml，15ml，摇15分钟后加入DNaseⅠ（0.1mg/ml), 感觉死的特别多。降低酶浓度也不太好，实在不知道怎么办了。大家一个胃能消化出多少免疫细胞呀？

niwanmao

胶原酶类型用D或IV型（可能会比I型更好），浓度0.5–1 mg/ml
DNase I 用0.05–0.1 mg/ml，在消化过程的最后5–10分钟使用。可以防止凝集，并且减少对细胞的毒性。
消化时间：15–30分钟。监测细胞活力。
如果要配合机械分离，尽量控制在30秒，且操作尽量温和
Percoll能富集免疫细胞，但可能会减少总细胞数量
预期收益1×10E5 –5×10E5个细胞


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4、流式分选和磁珠分选
此次先帮你转移过去，下不为例哦。