人外周血DC鉴定，lineage选择cocktial还是不同荧光的抗体?

wmj123456

最近看到一篇10年的文献，分别用4色和12色检测了DC细胞，有个图例说明4色检测总DC比例低，而不同荧光抗体的总DC比例高，差异还挺大的。我有2个疑问，1为什么总DC结果差异这么大？图例的解释没有很理解，附件是文献和图例解释，哪位老师可以帮忙解释下吗？


2我的DC方案是CD45 FITC ,CD3 APCCY7,CD56 PerCP-Cy5.5,CD14 PECY7,CD16 BV510,CD19 PECY7,CD20 PE,HLA-DR BV421，其中CD14和CD19是同一个荧光素，这样搭配应该没有问题吧

niwanmao

原因是4色方案把大量的系列排除标记（如CD3、CD14、CD20、CD56）放在一个通道，无法分辨是哪种细胞（T/B/NK/单核）被排除。由于信号重叠或弱表达，部分本应保留的DC可能被误排除，而部分污染的细胞（如低表达Lin的细胞）可能被误纳入（图A中污染高达42%）

12色方案，独立分析每个排除标记，明确排除T细胞（CD3+）、单核细胞（CD14+）、B细胞（CD20+）、NK细胞（CD56+），所以污染少很多

你这个方案问题不太大