刺激T细胞活化的两大类方法和评估其功能的四大类方法

niwanmao

若需评估T细胞功能，通常会采用抗原特异性活化方法或多克隆活化方法对T细胞进行体外刺激，并通过分析细胞增殖、细胞因子生成或活化标志物等指标来评估其功能反应。

刺激T细胞功能的两大类方法：
- 抗原特异性刺激： T细胞被代表感兴趣抗原的合成肽刺激。这种方法能够扩增和鉴定抗原特异性T细胞，通常随后进行再刺激以触发细胞因子产生。可以添加细胞因子（如GM-CSF、IL-4、Flt3-L）以支持树突状细胞（APC）发育，其向T细胞呈现抗原，并添加细胞因子（如IL-2、IL-7、IL-15）以促进T细胞增殖。然后定量效应因子水平（如IFN-γ、TNF-α、IL-2的产生）。  在这类实验中，一般建议设置合适的阴性对照（无关肽、DMSO）和阳性对照（有丝分裂原、PMA/离子霉素），有助于验证实验结果的准确性。
- 多克隆刺激法：抗CD3抗体或促分裂原（如佛波酯+离子霉素）等试剂可强力激活T细胞，且不受抗原特异性限制。该方法用于评估T细胞亚群的增殖或细胞因子生成的整体能力。


刺激后，T细胞的功能可通过以下方式进行评估：
- 增殖测定（例如，^3H-胸腺嘧啶摄取、CFSE稀释法）
- 细胞因子检测（例如，IFN-γ生成的ELISPOT检测、流式细胞术进行细胞内细胞因子染色）
- 活化标记 （如CD25, CD69, CD137等）
- 细胞毒性检测（针对细胞毒性T细胞：靶细胞裂解）


但需注意的是，不同刺激方法可能会影响不同的T细胞亚群（记忆vs初始），另外，以上刺激方法都属于过度刺激，可能无法反映生理活化的状态。


进一步阅读：
- New Methods for Assessing T-Cell Responses - PMC
- A T-cell-based immunogenicity protocol for evaluating human antigen-specific responses - PMC
- T Cells: Types and Function
- T cells in health and disease
- Ex vivo analysis of T-cell function