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[淋巴细胞相关] DiOC18 标记细胞的问题

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发表于 2012-4-12 10:18:34 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏1流星未解决
请问有用过 DiOC18 染液标记 细胞的战友不,DiOC18 溶于无水DMSO,浓度3mM,即2.65mg/mL,加入到细胞悬液后终浓度为26.5ug/mL,37度孵育20分钟后用DPBS 300g 5分钟 洗两次,然后+PI 染液,0度孵育30分钟,结果活细胞20%不到,而不经DiOC18 染液标记 的对照(37度孵育20分钟),活细胞90%左右,请问问题可能出在哪,是否 DiOC18 浓度高了?谢谢

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发表于 2012-4-12 17:24:23 | 显示全部楼层
DiOC18是什么玩意?
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 楼主| 发表于 2012-4-13 08:34:49 | 显示全部楼层
就是简称DIO的一种绿荧光染料,能与细胞膜结合,能标记很多种细胞。
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发表于 2012-4-13 10:08:53 | 显示全部楼层

哦。学习了。
从文献来看,你的浓度应该是偏高了:
The DIOC18 staining, which turned out to be far superior and which was therefore used in all subsequent experiments, was conducted as follows: a stock solution was prepared by dissolving DIOC18 (Sigma) in DMSO (2 mg/ml; Sigma) over
night with agitation. The NK cells (106 cells/ml) were incubated in 10 ug/ml DIOC18 (final concentration)
for 1 h at 37℃. Longer incubation periods as employed elsewhere (Kroesen et al., 1992) were not necessary to obtain ample staining. Cells were washed twice and maintained in medium (RPMI 1640 [Bio Whittaker, Boehringer Ingelheim, Germany] supplemented with 10% bovine serum and L-glutamine).



全文见: 100224TO7.pdf (184.12 KB, 下载次数: 7)
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发表于 2013-6-26 08:23:59 | 显示全部楼层
你好,我也想买Dio,请问您购买的厂家和货号是多少?多少钱?如果方便的话请告知,先谢谢啊。
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 楼主| 发表于 2013-9-9 11:39:41 | 显示全部楼层
Molecular  Probes,  Cat#D275
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