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[凋亡检测] 求PI-Annexin V检测,如何染色才能染好?

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发表于 2013-8-2 15:16:05 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏1流星未解决
我的朋友做了PI-Annexin V的凋亡。出现了一些很让人费解的图。
他们染色是1个小时,PI和Annexin V一起加入,水浴避光共孵化一个时。

看他们的图上是不是Annexin V的染色染的不好,还是我流式操作的问题。
求高手指点一二。谢谢

这张好像要好一点

这张好像要好一点

Q一区的细胞到不了Q2

Q一区的细胞到不了Q2

Q1区的细胞到不了Q2

Q1区的细胞到不了Q2

两单染(应该还是很合理的)

两单染(应该还是很合理的)
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发表于 2013-8-2 15:34:53 | 显示全部楼层
一个小时可能时间长了一点,一般室温15分钟就好了。单染的时候看起来效果还可以。另外一般PI单阳不会有那么多的比例才对,需要看看你的FS/SS怎么圈门的,最好能提供原始文件。理论上来说PI单阳的是没有膜结构的细胞核,或DNA碎片。从双染图来看流式操作问题不是很大,可能就是药物刺激的结果就是坏死不是凋亡,最好用阳性药做个对照,比如顺铂什么的。
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
发表于 2013-8-2 16:33:03 | 显示全部楼层
你让你的朋友把染色条件改为室温15分钟试试。应该是染色条件的问题。
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 楼主| 发表于 2013-8-2 17:08:53 | 显示全部楼层
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 楼主| 发表于 2013-8-2 17:11:24 | 显示全部楼层
didi_zhou 发表于 2013-8-2 15:34
一个小时可能时间长了一点,一般室温15分钟就好了。单染的时候看起来效果还可以。另外一般PI单阳不会有那么 ...

了解,谢谢。听说紫外线也可以造成很好的凋亡,很想试试
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发表于 2013-8-2 17:33:54 | 显示全部楼层
pushiming77 发表于 2013-8-2 17:11
了解,谢谢。听说紫外线也可以造成很好的凋亡,很想试试

从上面几张图看,只要染色时间和条件把握好,不需要阳性对照的。
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发表于 2013-8-10 18:55:02 | 显示全部楼层
室温十五分钟试试,1小时死太多了已经
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 楼主| 发表于 2013-8-10 22:03:24 | 显示全部楼层
我也觉得,还是在常温下,死的更快了
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