树突状细胞表面标记求助

晨光下的浪子

我现在准备做树突状细胞，而且培养之前我还要做HLA-A2检测，阳性的才要，但是买的HLA-A2抗体里头都没有流式的具体步骤。培养DC后也还要检测CD40、CD86、HLA-DR（现在已买了这三个抗体检测成熟度，其他的也没时间买了），但是都没做过流式，还请各位前辈多多指教

niwanmao

表面标记都差不多，具体protocol可在本站"书籍和资料"板块的protocol分类找。

sally_no10

尽量买直标的,如果可以做出来,用完还是买同样克隆的抗体.换品牌,货号,克隆号都会有差异.不方便你做前后对比和质控.尤其是给了干预,容易出假阳性.

晨光下的浪子

sally_no10 发表于 2013-11-20 18:47

                               
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尽量买直标的,如果可以做出来,用完还是买同样克隆的抗体.换品牌,货号,克隆号都会有差异.不方便你做前后对比 ...

嗯，谢谢指导。我现在的HLA-A2是间标的，前两天用我们师弟的血做了预实验，检测的四例刚好都是阳性的（也不知道是真的都是还是有假阳性？！），因为也是第一次做流式，虽然看步骤简单，但是操作起来想保证足够的细胞数还是觉得很难的，毕竟中间那么多次离心，有些时候都看不到沉淀不敢确定还有没有细胞了。这个是用二抗做的阴性对照。后面那个CD40等就打算用同型对照。我还想请教一下，这个同型对照有必要么？还有期间的PBA洗涤步骤可以用PBS代替吗（因为叠氮钠是有毒的吧）？恳请指导

niwanmao

晨光下的浪子 发表于 2013-11-21 10:09

                               
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嗯，谢谢指导。我现在的HLA-A2是间标的，前两天用我们师弟的血做了预实验，检测的四例刚好都是阳性的（也 ...

PBA？没听说过，加了叠氮钠的PBS？洗涤的话用PBS就可以了。
实在要排除一些非特异性Fc片段结合，可以用FBS（含胎牛血清的PBS，有卖的）。
单标的话，还是需要同型对照。

晨光下的浪子

niwanmao 发表于 2013-11-21 12:15

                               
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PBA？没听说过，加了叠氮钠的PBS？洗涤的话用PBS就可以了。
实在要排除一些非特异性Fc片段结合，可以用FB ...

嗯，PBA就是PBS+牛血清白蛋白+叠氮钠。因为在网上看见直接免疫荧光染色法里好多都提到，所以就想问问现在是不是需要了。我看一些资料里说像树突状细胞（DC）是Fc段的抗体结合的，因为我做的就是DC，所以不知道要不要排除了

niwanmao

晨光下的浪子 发表于 2013-11-21 17:58

                               
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嗯，PBA就是PBS+牛血清白蛋白+叠氮钠。因为在网上看见直接免疫荧光染色法里好多都提到，所以就想问问现在 ...

叠氮钠不需要。叠氮钠一般用于抗体的保存上。