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[标本处理] 表面抗原检测,封闭的问题

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发表于 2014-2-20 11:13:21 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏1流星未解决
做流式检测,测细胞表面抗原的,发现在细胞样本制备过程中,有人在检测样本管的细胞中加小鼠的血清封闭15min,之后再加各种直接标记的抗体,说可以减少非特异性吸附,想问下倪老师,1)这种封闭液加与不加结果差异大吗?2)如果测人细胞表面抗原,用鼠抗人的抗体标记,是不是封闭时一定要用小鼠的血清?


3)想请倪老师给个比较常用的,测细胞表面抗原时,细胞样本处理的步骤,谢谢啦

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发表于 2014-2-20 12:29:50 | 显示全部楼层
(1)一般说来,现在大多数单克隆抗体的特异性还是不错的,所以加不加问题不大,不过对于一些多克隆抗体或特异性较差的单抗,还是建议封闭。

(2)如果用鼠抗人抗体测人细胞表面抗原,可用如下封闭液,在抗体标记之前作用15分钟并洗涤:
0.05 M Tris缓冲液,pH 7.4
1%正常小鼠血清或0.1mg/ml 小鼠IgG
2%胎牛血清
0.1%叠氮钠

(3)细胞表面染色的步骤以前发过几个:
http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-213-1-1.html
http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-711-1-1.html
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 楼主| 发表于 2014-2-20 15:18:22 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2014-2-20 12:29
(1)一般说来,现在大多数单克隆抗体的特异性还是不错的,所以加不加问题不大,不过对于一些多克隆抗体或 ...

倪老师,你发的链接找不到
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发表于 2014-2-20 19:03:05 | 显示全部楼层
willow2013 发表于 2014-2-20 15:18
倪老师,你发的链接找不到

不好意思,中午发的时候仓促间把两个链接并在一起,乱掉了。
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发表于 2015-7-6 13:58:03 | 显示全部楼层
倪老师,我做的是多标的分选,买的有鼠抗人和兔抗人抗体,封闭的时候找到的Human FcR block说明书上写的针对鼠抗人抗体The human FcγR-binding inhibitor can be used to inhibit the non-specific Fc-gamma receptor (FcγR)-mediated binding of mouse monoclonal antibodies used for flow cytometric analysis of human tissue.那我这还能用么。。
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发表于 2015-7-6 15:23:35 | 显示全部楼层
shankelj1991 发表于 2015-7-6 13:58
倪老师,我做的是多标的分选,买的有鼠抗人和兔抗人抗体,封闭的时候找到的Human FcR block说明书上写的针 ...

不知道,先用用看吧
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发表于 2016-4-6 13:32:49 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2014-2-20 12:29
(1)一般说来,现在大多数单克隆抗体的特异性还是不错的,所以加不加问题不大,不过对于一些多克隆抗体或 ...

倪老师,胞内染色的背景很高,封闭FC受体有用吗
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发表于 2016-4-6 13:34:48 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2015-7-6 15:23
不知道,先用用看吧

倪老师,胞内染色的背景很高,封闭FC受体有用吗?如果加的话是在表面染之前加还是破膜之后加?
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发表于 2016-4-6 18:25:36 | 显示全部楼层
mcdfish 发表于 2016-4-6 13:34
倪老师,胞内染色的背景很高,封闭FC受体有用吗?如果加的话是在表面染之前加还是破膜之后加?
...

胞内染色是因为固定剂和破膜剂的影响,非特异性染色确实强,这个问题目前还没有很好的办法解决。Fc封闭只对表面抗原有用。
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