凋亡单标染色

huoguang980789

说白了就是把细胞弄死，水浴更方便一些

hyper

您对补偿的这种感觉我们也经常被问到，它比较多的发生在用弱信号组调补偿后，检测强信号样本的情况。这样的情况下，不是补偿本身的问题，是您没有调准。

原因是弱信号群和阴性群比较接近，您看着横平竖直了，但可能与正确的补偿之间有微小的差距。上其它样本信号放大10倍或100倍以后，差距就被放大了很难保证补偿仍然正确。

所以需要用最强的样本调补偿，

更好的方案是用不同激光激发，从根本上避免补偿，即免调补偿，不但操作简单，而且信噪比高。比如 PI（488激发）配合AV-APC（633激发），或AV-BV421（405激发）。

watson77

PI没有漏到FITC通道，FITC有小部分漏到PI通道。调补偿要求阳性群和阴性群都有比较多的细胞群。如楼上所述，用加热或反复冻融等方法让细胞坏死，呈现Annexin V和PI双阳性，与活细胞1：1左右混合后，染Annexin V或PI单标，调补偿。

lin850424

samly0 发表于 2014-3-18 17:49
我觉得最简单的办法，就是用离心管或者流式管取点对照组的细胞悬液放到超净台开紫外灯照个半小时以上，或者 ...

用了这两种方法，感觉效果不明显啊，看图吧，percp-cy5.5是7-AAD，名称没改而已。

niwanmao

lin850424 发表于 2014-3-29 21:48
用了这两种方法，感觉效果不明显啊，看图吧，percp-cy5.5是7-AAD，名称没改而已。 ...

你用的是什么细胞株？

lin850424

niwanmao 发表于 2014-3-29 22:06
你用的是什么细胞株？

原代细胞，T淋巴细胞

niwanmao

lin850424 发表于 2014-3-29 23:11
原代细胞，T淋巴细胞

诱导凋亡做阳性对照，可参考abcam的这个手册，更正规一些（我们以前对于Jurkat细胞株，一种T系肿瘤细胞，一般常使用喜树碱，这个手册里面倒是没有提到）：
https://www.flowcyto.cn/bbs/forum.php?mod=attachment&aid=NTQ2NHw1N2Y3Yzk0MXwxNzE2OTc0NDI3fDB8

samly0

lin850424 发表于 2014-3-21 15:39
是不是也可以用此方法来进行阳性对照啊，就是把抗体加全，再紫外照射或水浴，看其阳性表达。 ...

先照了紫外、水浴或其他诱导凋亡的方法处理过细胞后，洗涤，离心，重悬后再加抗体做单标管

samly0

lin850424 发表于 2014-3-29 21:48
用了这两种方法，感觉效果不明显啊，看图吧，percp-cy5.5是7-AAD，名称没改而已。 ...

先把含血清的培养基去掉，换成PBS，铺到一培养皿里放超净台里照，半小时不行就改成2小时以上吧，整死细胞还是比让细胞活容易点的

leosurely

hyper 发表于 2014-3-24 21:06
您对补偿的这种感觉我们也经常被问到，它比较多的发生在用弱信号组调补偿后，检测强信号样本的情况。这样的 ...

谢谢提醒，下次按照您的方法调试试