PBMC CD4 CD8 IFN-γ

duandian21

小弟新人一枚，没接触过流式，但实验要用到流式，周围无人可以请教，所以来此求前辈指点。。。实验周期为两个月，每周采血分离PBMC，检测CD4，CD8，和IFN-γ，目前单抗已备好，但貌似IFN-γ检测有点繁琐，貌似要准备破膜液、固定液什么的。。。忘各位指点，除了单抗之外，还需要准备哪些耗材。。方面的话，具体步骤告知小弟一二。。。

aninawang

ifn-r在胞浆表达，需要先进行刺激培养阻断再固定破膜染色。
步骤：1.取得的PBMC调整浓度约1*106，在24孔板，1ml体系，加入PMA/IO/Monnense 刺激约4-5h；
2.取出细胞PBS洗后染膜抗体，约20-30min；
3.PBS洗后，固定破膜剂处理（BD或Beckaman都有，具体步骤和时间需要根据说明书调整）；
4.加ifn-r孵育约30min，PBS洗后上机分析。
另外，你染胞内的ifn-r对采学是的抗凝剂是有要求的，需要肝素钠抗凝。
希望对你有帮助。