edu流式增殖

njlly

大家好，想咨询下有没有做edu增殖的，我用edu处理的步骤是在细胞贴壁24h，加edu和促增殖药物，共培养24h，流式结果分析对照组和加药组阳性细胞率几乎接近100%,但是加药组的荧光强度明显高于对照组的，所以想请教大家，这个具体怎么分析啊，刚开始做流式，不熟悉，另外流式老师给分析出了PDF的荧光强度的，我看不到具体的比例，希望有熟悉的老师帮解答下，原始数据和流式老师做的分析我都上传了，谢谢了

niwanmao

与PI同时染了？貌似分得不好啊。

njlly

老师，当时我和流式老师说是单染，就是染了Apollo567，但是也染了Hoechst33342这个染料，但由于当时没说清楚，所以说是单染了，您分析细胞没有分群是么？还是由于单染看不出来，得结合核染的分析才能分析结果呢？

niwanmao

njlly 发表于 2015-9-18 22:39
老师，当时我和流式老师说是单染，就是染了Apollo567，但是也染了Hoechst33342这个染料，但由于当时没说清 ...

那获取的信号通道都不对啊。Apollo567应该是cy3染料的荧光通道，488nm激发，567nm接收。hoechst33342应该是紫外光通道激发。

njlly

天哪，那老师，流式老师帮我的检测通道都做错了？所以才出现这个结果（细胞时间培养很短6h,可是细胞全染上了）是么老师？下次做的时候我就按照您说的这两个通道再重新做，看看是什么结果了，可奇怪的是我用的edu试剂盒 C10338-1 Cell-Light EdU Apollo567 In Vitro Flow Cytometry Kit (20T)，而且告诉流式老师的激发波长是根据说明书里推荐(在上传的图片里) ，实验我都连做了3遍，只是看到实验组荧光强度增强趋势对了，结果进行结果分析才发现流式图细胞成团，都不对！！真的太谢谢您了老师！！！

niwanmao

njlly 发表于 2015-9-19 17:02
天哪，那老师，流式老师帮我的检测通道都做错了？所以才出现这个结果（细胞时间培养很短6h,可是细胞全染上 ...

如果有黄光的激光器，Apollo 567是最好的搭配，实在没有可以用488nm，激发效果会差一些。
hoechst33342必须用紫外激光激发。

所以你要确认流式细胞仪是否具备这两种激光，如果没有还是换染料吧。这次取的肯定不对。

njlly

niwanmao 发表于 2015-9-20 10:48
如果有黄光的激光器，Apollo 567是最好的搭配，实在没有可以用488nm，激发效果会差一些。
hoechst33342必 ...

倪老师，还是得麻烦您帮分析下，后来我又做了edu流式，按照您的建议，这次是两个通道-Apollo 567是488激发，567发射，是PE通道，hoechst33342是355的紫外光通道激发，但是分析的图很奇怪，跟理想的结果图不一样，不知道哪里不对，原始数据我上传了，再次麻烦您帮分下（1组未染色的细胞，两组对照（c1,c2），四组实验组（10%-1,10%-2；200-1,200-2））

facetodog

看着货号好像是锐博的试剂盒，这套试剂盒在代理商那购买时候以及之后标记之前都应该根据你的流式细胞仪或者是激光共聚焦的仪器配置来选择产品货号。Cy3用488nm通道激发是非常勉强和无奈的做法，如果一定要做，在增殖活动明显的情况下提高电压可能会得到一些分的开的信号。建议你买的这个试剂盒用来做激光共聚焦，不要继续在流式上浪费你这盒探针了。