提高阈值能提高分选速度吗

steven

今天看流式相关的书籍，其中提到适当的提高阈值有助于减少分选时间，提高分选速度。FSC阈值一般用于排除碎片和小颗粒，当有大量碎片的时候提高阈值可以增加目标细胞的百分比，从而减少分选时间。
这里有一个小疑问，提高阈值目标细胞的比例是上升了，但是通过喷嘴的液滴数量并没有改变啊，只不过是FSC低的那部分没在图上显示而已，怎么会提高分选的速度呢？
不知道我说没说清楚，欢迎大家帮我解答。

a86856635

主要和分选模式有关，分选有enrich、purify、single模式。enrich模式分选液滴中的所有阳性细胞，purify分选100%阳性的液滴，single分选100%且只有一个颗粒。阈值大小对enrich没有影响。purify和single模式下，阈值以下的碎片不分析，如果在液滴内也会被分选出，所以阈值提高，分选速度会提高

niwanmao

我的看法也相似，提高阈值使图形更干净，存储的数据更小。但对分选时间应该是没有影响啊。不过对分选不太精通，需要那些分选高手来解读一下@didi_zhou  @gcz5340  

steven

niwanmao 发表于 2017-4-4 19:20
我的看法也相似，提高阈值使图形更干净，存储的数据更小。但对分选时间应该是没有影响啊。不过对分选不太精 ...

谢谢倪老师回复 也希望大家帮我解答一下

happyeday

a86856635 发表于 2017-4-5 10:02
主要和分选模式有关，分选有enrich、purify、single模式。enrich模式分选液滴中的所有阳性细胞，purify分选 ...

您好！那么对于purify和single模式，如果阈值高的话，岂不是纯度会受影响？

steven

a86856635 发表于 2017-4-5 10:02
主要和分选模式有关，分选有enrich、purify、single模式。enrich模式分选液滴中的所有阳性细胞，purify分选 ...

谢谢您的说明。
那这么说的话，一定要能确定阈值之下的确实是碎片之类的杂质，如果有尺寸很小的细胞包含在阈值以下的话，势必会被分选进来影响细胞的纯度，对吧？！

a86856635

happyeday 发表于 2017-4-5 13:37
您好！那么对于purify和single模式，如果阈值高的话，岂不是纯度会受影响？ ...

purify和single模式是相对比较严格的，纯度通常不会影响很大，细胞中残留碎片其实也是很难避免的，看实际需要吧

a86856635

steven 发表于 2017-4-6 09:24
谢谢您的说明。
那这么说的话，一定要能确定阈值之下的确实是碎片之类的杂质，如果有尺寸很小的细胞包含 ...

个人认为阈值不要切的太大，细胞碎片还是要露出一些来的以免把真正的细胞信号丢失，如果细胞很小，小到和碎片混在一起，我觉得不是细胞状态有问题就是仪器该校正了

happyeday

a86856635 发表于 2017-4-7 20:59
purify和single模式是相对比较严格的，纯度通常不会影响很大，细胞中残留碎片其实也是很难避免的，看实际 ...

谢谢您！也就是说最后的分选纯度，其实也取决于样品的好坏。如果样品中的碎片太多，我们是无法去除得很干净的。这个对于组织来源的细胞不太容易避免。万幸的是应该不会影响实验。

dlynne

个人认为把阈值提高以后阈值以下不分析了那显示的event/s会减少，比如碎片比较多，一般流速下显示20000event/s，当提高阈值以后，同一流速下变成了5000event/s，那流速就可以提高了，分选的速度也会加快，但是去掉阈值以下的信号以后，目的细胞占ALL里的比例会提高，图形也有可能出现变化，所以阈值不能提的太高。