flwojo多色划门问题

绝望当中生明天

第三张图片从lin-里筛LSK和Progenitor.得到的细胞群很奇怪，感觉无法划门。是第一次做多色分析，想请教一下该如何处理呢。

whyxa

绝望当中生明天 发表于 2017-6-4 23:25
老师，我从图二中筛出lin-。到图三，理论上图三应该能出现四种类型的细胞群，这样我用四分门就能够区分。可 ...

没错，图三是有四群细胞分布，但那个确实是非特异性染色，首先是你没有进行设门优化。我个人一般先用FCS-A和FCS-H，先把粘连细胞排除，然后FCS-A和SSC-A选取目标细胞群，然后SSC-W和SSC-A选取主流细胞群，这些都是排除死细胞和粘连细胞的干扰，如果你的标本来源血和淋巴结可以不用live/dead之类染料区分死细胞和活细胞，但是你的标本是经过组织机械分离和胰酶消化而来的，尽量用这类的染料去除，能后大大的减低非特异性染色，图也很漂亮，之后就是调节补偿和优化组合， 补偿就不多说了，优化组合呢，有些染料和染料之间会有螯合，形成奇怪的图形，很明显的非特异性染色，你可以把它框除在靶细胞群外之后继续设门，你也可以把这个奇怪的细胞群通过反设门，看看它在其他细胞群图中的位置，多色流式分析就是只能尽可能的优化，没有绝对的完全perfect，如果你还不明白，你可以加我QQ：602203156。

niwanmao

平时我们看到图三这个样的分布基本上都会认定为非特异性染色，但是我不太清楚你所谓的LSK正常表型应该是什么样的？

绝望当中生明天

老师，我从图二中筛出lin-。到图三，理论上图三应该能出现四种类型的细胞群，这样我用四分门就能够区分。可是，就算我调过荧光补偿之后，也还是没什么变化。

绝望当中生明天

另外老师说的非特异性染色是什么意思啊。。。。

774055480

为什么没有用相应染料排除一下死细胞的影响

niwanmao

绝望当中生明天 发表于 2017-6-5 15:26
另外老师说的非特异性染色是什么意思啊。。。。

非特异性染色很多来源，一种是细胞本身引起的，可能是非特异性粘附抗体，或者其自身颗粒荧光干扰，这种一般荧光比较弱，另一种是死细胞，这种死细胞引起的会特别强。所以像@774055480  站友所说的，用死活染料排除掉死细胞，还有排除掉粘连体，这样可能会避免这种情况出现。

whyxa

whyxa 发表于 2017-6-5 13:48
没错，图三是有四群细胞分布，但那个确实是非特异性染色，首先是你没有进行设门优化。我个人一般先用FCS-A ...

最好通过反向设门看看这群细胞的来源！是不是其他颜色组合也会有相类似的奇怪的图，，如果也有，一并去除了/

绝望当中生明天

谢谢各位老师的帮忙解答。。。

绝望当中生明天

绝望当中生明天 发表于 2017-6-6 10:39
谢谢各位老师的帮忙解答。。。