同样来源的全血上流式分群变化

shiyue

请教倪老师：
实验需要检测小鼠外周血中性粒细胞呼吸爆发功能；故先取一只正常小鼠，取外周血，加入ly6G抗体孵育，上机，调整电压得到比较理想的分群，并保存所有方案的参数；第二次实验，同样的操作步骤，未加抗体，上机后，用之前的方案和电压参数，细胞分群完全变了，不知道会是什么原因？
为何有些时候做出的小鼠中性粒细胞分群的FS轴值比单核淋巴还低？有技术说我用的是贝克曼FC500的流式细胞仪，用BD的溶血素这样会影响细胞的分群；因为小鼠的血比较珍贵，我有时候为了留血浆，所以会先离心2000rpm取血浆后，再用血细胞加抗体，上流式，这样会对细胞形态和分群有影响吗？

miliamlau

尽管你的阈值设得过高，你的散点图上也看不出点的密度。但第二张图上有未充分裂解红细胞的迹象。可能是你第二个数据中收到了大量的未裂解红细胞，真正有用的白细胞群收的很少。

建议不要纠结分群和FSC的问题，加染一个CD45抗体用来更客观地分群，去除掉可能干扰。并把停止采集条件设在粒细胞门上，保证每次收集目标细胞数基本一致。

CD45+SSC对外周血分群是酱婶的：

                               
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一切干扰都被挡在CD45阳性之外

niwanmao

BD的溶血素含固定成份，会对细胞分群有影响。
不过对于抗原表达影响不会太大。