流式实验中的困惑？

a3351460

           当我取小鼠骨髓细胞，染APC-gr1，PECY7-ckit。结合自身实验，有以下疑问。
1、是否需要封闭？封闭剂应该选什么，小鼠血清可以吗？
2、如果不封闭，发现iso组特异性结合特别多，尤其是PECY7-ckit，这是什么原因？
3、特异性结合多的话，是不是要两个单阳管去调补偿？如果特异性结合比较少，并且通道之间没有干扰，是不是就不需要单阳管。直接ISO和双阳管就可以？
4、调节电压，发现单阳管的阳性群和阴性群区分并不是很明，什么方法可以使他们区分更明显？

robert1988

我们用Innovex 的FcR Blocker效果不错，就是有点小贵。

sunny2829

http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-5510-1-1.html
1、Fc受体阻断：使用试剂阻断Fc受体可以有效减少非特异荧光染色。iso组特异性结合特别多，就是因为存在非特异荧光染色，可选阻断剂有：
（1）商品化的Fc Block（25ug/ml或10ug/ml）；
（2）2.5％或10%的人血清或小鼠血清；
（3）100ug/ml的人IgG。
2、PECY7是488nm激光激发，APC是633nm激光激发，理论上不重叠无干扰，可以不做补偿的。
3、单阳管的阳性群和阴性群区分并不是很明显，需确定抗原表达密度，细胞活性，抗体使用量（抗体滴定）等情况。

a3351460

robert1988 发表于 2017-12-11 22:34
我们用Innovex 的FcR Blocker效果不错，就是有点小贵。

好的。封闭的效果确实要好点。

a3351460

sunny2829 发表于 2017-12-12 09:02
http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-5510-1-1.html
1、Fc受体阻断：使用试剂阻断Fc受体可以有效减少非特异 ...

感谢感谢。

a3351460

sunny2829 发表于 2017-12-12 09:02
http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-5510-1-1.html
1、Fc受体阻断：使用试剂阻断Fc受体可以有效减少非特异 ...

抗原表达比较低就难于区分吗？增加抗体的量及孵育时间可以让阴性群和阳性群分开吗？谢谢。如果pecy7和apc没有干扰，我是否可以不需要单阳管，直接iso管和双阳管就可以？