流式细胞术在细菌检测中的应用

xiaopuasd

采用SYBR Green I染色，想问下游离DNA对染色结果有干扰该怎么办？

                               
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没有辅料的离心上清液检测结果，P1为圈定的染色后菌群的位置

                               
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加了吐温（加吐温是为了更好地分散产品中细菌）和辅料的，可以看到P1有菌
所以我觉得是游离DNA会对检测结果产生干扰，想问下这种情况要怎么解决

niwanmao

你这里第二张图加了吐温的，也有细菌？吐温有裂解作用，细菌都被裂掉了吧，所以导致SYBR没出来。

xiaopuasd

niwanmao 发表于 2021-3-30 09:41
你这里第二张图加了吐温的，也有细菌？吐温有裂解作用，细菌都被裂掉了吧，所以导致SYBR没出来。 ...

图的顺序是反的。。。
图片2（第一张图）是加了吐温，辅料（麦芽糊精二氧化硅），离心上清液（细菌破碎后游离的dna片段）
图片1（第二张图）是仅有离心上清液（细菌破碎后游离的dna片段）染色的结果
我想问的是游离的DNA加入辅料后为什么荧光信号变强，影响到我们检测结果？

niwanmao

xiaopuasd 发表于 2021-3-30 16:52
图的顺序是反的。。。
图片2（第一张图）是加了吐温，辅料（麦芽糊精二氧化硅），离心上清液（细菌破碎后 ...

我还是没理解，你的意思是你们直接用抗体标记DNA？DNA和荧光抗体结合后形成的分子，是运小于流式仪器的检测限，不可能测的到的。如果完整的细菌是测的到的。

至于你所说的的加入辅料后荧光信号增强，是完全有可能的，因为这些干扰物质，都是会影响整体的非特异性荧光的。