小鼠淋巴细胞荧光配色问题

不停

各位老师好，我之前没有做过流式，最近实验需要做流式检测肿瘤中浸润的淋巴细胞数目，在做了一些了解后有几个问题：
1、荧光配色方案：求一份好用的淋巴细胞配色方案。我需要检测CD8+T细胞、CD4+T细胞、NK细胞、DC、Treg细胞、B细胞，我自己在了解之后做了一个配色方案，但不知道行不行；PerCP/Cyanine5.5-CD45、FITC-CD3、PE/Cyanine7-CD8、Alexa Fluor® 700-CD4、PE-CD49b、APC-CD19，这是之前做的不包含DC以及Treg在内的方案，后面还要加DC和Treg我就不知道该怎么配色和配管了，求助；（流式检测仪是三激光十三通道的：488、640、405）
2、每个荧光都需要补偿吗？那我是每个样本的每个荧光都要设置一个单色染色吗？
3、对于小鼠肿瘤细胞流式样本的保存各位老师有什么好的方法和推荐的试剂吗？

niwanmao

CD45.2、TCRβ、CD4、CD8、CD49b、CD11b、CD11c、MHCII、foxP3、CD19
这样一共10个抗体，可搭配成一管。
原则上，foxP3、CD49b建议安排亮的荧光素，如PE和APC，其它荧光素可随意选择。

不停

niwanmao 发表于 2021-11-25 10:07
CD45.2、TCRβ、CD4、CD8、CD49b、CD11b、CD11c、MHCII、foxP3、CD19
这样一共10个抗体，可搭配成一管。
原 ...

好的，谢谢倪老师！另外关于补偿的问题还想问一下，如果配成一管的话我需要每个荧光都设置一个单染吗？这样好费样本或者还有其他方法吗？

niwanmao

不停 发表于 2021-11-25 16:27
好的，谢谢倪老师！另外关于补偿的问题还想问一下，如果配成一管的话我需要每个荧光都设置一个单染吗？这 ...

如果想标准一点，尽量每个荧光都做单染。
但经验丰富者，可以在全染样本中，通过内对照进行补偿调节。