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[细胞增殖] BrdU和PI双染结果分析

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发表于 2022-4-3 17:12:56 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏1流星未解决
FITC-BrdU和PI双染上机,对照组有单染PI、单染BrdU、未进行BrdU处理加入BrdU抗体和PI
实验组有对照组和两个处理组
直接用原始数据分析,FITC有两个峰,但是感觉补偿不太对;补偿调整后(如下图)横平竖直,FITC只有一个峰了,不知道哪种情况是对的
FITC和PE补偿应该怎么调

111.png 555.png 444.png 333.png 222.png

圈门应该是以未进行BrdU处理加BrdU抗体作为阴性对照来圈吗,还是按照别的对照呢?
原始数据我上传在下面。(Blank指未进行BrdU处理但双染)
求大神帮忙解答!!!

2022-4-1 BrdU PI.zip

2.32 MB, 下载次数: 2

组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
 楼主| 发表于 2022-4-3 17:14:08 | 显示全部楼层
不知道图片为什么没发出来
流式中文网FlowGuard®流式专用保存液,无需冻存,稳定保护各类流式样本,从容完成实验
发表于 2022-4-4 10:08:50 | 显示全部楼层
Jeffery_9 发表于 2022-4-3 17:14
不知道图片为什么没发出来

图片未显示出来是因为你上传图片的方式不对,需要通过“高级模式”编辑器工具栏上的上传图片按钮上传。你是不是直接拖到框里面了?

至于分析,可用Blank管设置,但是似乎实验管都没跑出明显的BrdU+群体,是不是试剂或处理中出了啥问题?

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 楼主| 发表于 2022-4-4 15:00:24 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2022-4-4 10:08
图片未显示出来是因为你上传图片的方式不对,需要通过“高级模式”编辑器工具栏上的上传图片按钮上传。你 ...

现在看图片又出来了
用Blank管设置的意思是未用BrdU处理,但有抗体的这一管就是圈门的阴性对照吗?
补偿调的我不知道对不对,都没有明显的阳性群是说和Blank比变化很小是吗,但是单染BrdU确实有两群细胞啊
我是收细胞前加BrdU孵育一小时,固定完之后加DNase孵育了一小时染色(按照BD的BrdU Flow Kits的protocol做的,应该没问题吧)

BD Pharmingen BrdU Flow Kits Instruction Manual.pdf

492.03 KB, 下载次数: 5

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发表于 2022-4-4 15:03:51 | 显示全部楼层
Jeffery_9 发表于 2022-4-4 15:00
现在看图片又出来了
用Blank管设置的意思是未用BrdU处理,但有抗体的这一管就是圈门的阴性对照吗?
补偿 ...

图片是我帮你另存为,然后重新上传的


是需要用未加BrdU但加了抗体的这管,因为这个可反映出抗体的非特异性结合。

补偿可微调,使其放平,但是双染确实没分群出来,单染和双染的操作是一样的?仔细回忆一下是否存在什么细节上的差异?
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 楼主| 发表于 2022-4-4 15:31:50 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2022-4-4 15:03
图片是我帮你另存为,然后重新上传的

谢谢倪老师
那这个blank管加了PI也没影响吧
上面那张补偿调节图里面算是放平了吗,
操作应该是一样的,因为是染色前从其他孔里面吸出来一点细胞做的单染管
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发表于 2022-4-4 15:59:25 | 显示全部楼层
Jeffery_9 发表于 2022-4-4 15:31
谢谢倪老师
那这个blank管加了PI也没影响吧
上面那张补偿调节图里面算是放平了吗,

加了PI才好拿来做参照的。这其实相当于多色流式的FMO似的。

可多试几次看看,尤其是各步的孵育时间延长看看。科研实验经常这样,很多时候不会一次成功的。
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 楼主| 发表于 2022-4-4 16:04:26 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2022-4-4 15:59
加了PI才好拿来做参照的。这其实相当于多色流式的FMO似的。

可多试几次看看,尤其是各步的孵育时间延长 ...

好的,多谢老师
我下次准备试试APC-BrdU的抗体,请问我需要设置什么别的对照管吗
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发表于 2022-4-4 21:17:47 | 显示全部楼层
Jeffery_9 发表于 2022-4-4 16:04
好的,多谢老师
我下次准备试试APC-BrdU的抗体,请问我需要设置什么别的对照管吗 ...

暂不需要。
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