求助：细胞周期两个峰很宽，分不开是什么原因

小巴人儿

做了很多次细胞周期，结果一直不理想。两个峰很宽，分不开步骤：
冷PBS洗两遍，消化，800rpm 6min离心
弃上清，冷PBS洗一遍，800rpm 6min离心
弃上清，轻弹管底，加入125微升PBS混匀，再加入375微升冷无水乙醇。-20度固定48小时、
配置PI染液，PI 50ug/mL，0.1% Triton，加RNA酶，冰上孵育20min，检测

sunzheng_99

1 你用试剂盒做的？ 冰上20分钟？
2 把流式上怎么设么门的图传上来看下。
3 可以尝试把电压加大点  比如第一个锋调到50 chanl ,再看第二锋就更好些

justletitflow

PI做周期是用2通道吗？

niwanmao

justletitflow 发表于 2019-7-12 10:23
PI做周期是用2通道吗？

大多数机器用FL2，少数机器会用FL3，主要是看机器滤光片的配置。

Smile14

近期我同事做的细胞周期的图以BD自带的分析软件分析也是这么奇怪，用的是LM3肝癌细胞系做的，试剂盒说明书是我给他找的理应没问题的，试剂盒是索莱宝的，先是4° 75%预冷乙醇固定2h乃至过夜，pbs洗，RNA酶，PI染色。第一个峰我一般调到50左右，帮别人上了几次都是正常的周期图到他这就跟你图片这很像

niwanmao

Smile14 发表于 2019-7-16 23:52
近期我同事做的细胞周期的图以BD自带的分析软件分析也是这么奇怪，用的是LM3肝癌细胞系做的，试剂盒说明书 ...

有时候同样一个Protocol，不同的人做出来就是不一样，后来发现问题都在细节上面

Smile14

niwanmao 发表于 2019-7-17 10:39
有时候同样一个Protocol，不同的人做出来就是不一样，后来发现问题都在细节上面 ...

谢谢老师