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最近，Kristensen MW等人发现了一个有趣的现象，即来自健康供体的外周血单个核细胞（PBMC），特别是单核细胞，对巨噬细胞甘露糖受体（CD206）的染色呈弱阳性。 这些实验是使用小鼠抗人CD206 PE-Cy7抗体（BioLegend，克隆号15-2）进行的。 但是，现有文献中已经明确单核细胞不表达CD206。 于是作者进一步研究了该现象背后的原因。
滴定实验的初步结果引起了他们的关注，下图A排除碎片、死细胞、粘连体之后，图B分析15-2克隆号的CD206 PE-cy7抗体在各系的表达，发现单核细胞衍生的巨噬细胞（MDM）的CD206染色阳性（符合预期），而单核细胞也出现弱阳性（不符合预期）（下图的A + B）。 更有意思的是，当使用相同克隆但结合了APC荧光素的抗CD206克隆，在来自相同供体的PBMC上重复实验时，结果显示CD206在MDM上表达，但在PBMC上不表达（下图C）。 使用另一个克隆（抗CD206 PE，克隆号19-2，BD Biosciences）进行的另一个实验的数据也显示CD206在MDM上表达，但在PBMC上不表达（下图的D）。
实验探索到此，作者开始怀疑与PE-Cy7偶联的抗CD206抗体的非特异性抗体结合，可能不能被人IgG（100 µg/mL）的Fc受体阻断所去除。 不过为了排除是否是由抗体聚集引起的，作者在使用前再次离心了一下206 PE-Cy7抗体（5000xg 5分钟），但并不能减轻单核细胞的CD206假阳性。
因此，作者强烈怀疑PE-Cy7荧光染料是造成此问题的原因。于是他们又做了19次鼠IgG1同型对照，结果发现所有显示出与单核细胞明显非特异性结合的都是PE-花青素串联染料（特别是PE-Cy5和PE-Cy7），而其他几个IgG1同种型对照显示有限或没有非特异性结合，例如PerCP-Cy5.5，AlexaFluor 647（AF647）和BV510和一个PC5。
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发表于 2020-12-4 14:41:51
发表于 2020-12-4 15:31:44
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