一步一步教你做细胞周期实验

niwanmao

本视频搬运自https://www.youtube.com/watch?v=RbisI3fws_g，中文字幕为机器翻译自动生成，其中不少低级错误，请忽略之。英文字幕也是自动生成，但相对错误较少，可作为理解上的参考。如果听力没问题的FLOWER，可完全忽略字幕。 这段视频，从细胞周期的概念、原理开始讲，然后到实际操作的一步步演示，尤其中间那段「边振荡边加入乙醇」的操作，相信给无法理解这个操作的FLOWER一个非常直观的印象。 视频见下：

niwanmao

Veblen 发表于 2023-4-22 23:45
老师我想问两个问题：
1. 为什么周期破膜需要用预冷的乙醇？常温的乙醇不可以吗？
2. 周期拟合用两种模式， ...

用预冷的乙醇，可减少细胞之间的粘连。

拟合算法，大多用watson。

lulixian669

倪老师，这个视频操作讲的比较详细了，但是实验步骤，尤其是乙醇固定穿孔的时间只用了冰上15min，是不是跟我之前做的4℃（2h-过夜）差异比较大啊。@niwanmao

niwanmao

lulixian669 发表于 2021-2-23 21:14
倪老师，这个视频操作讲的比较详细了，但是实验步骤，尤其是乙醇固定穿孔的时间只用了冰上15min，是不是跟 ...

这个15分钟，如果操作得当，也是染的出来的，乙醇的破膜能力还是不错的。但是保险起见，4度24小时，当然最好。

tiger

lulixian669 发表于 2021-2-23 21:14
倪老师，这个视频操作讲的比较详细了，但是实验步骤，尤其是乙醇固定穿孔的时间只用了冰上15min，是不是跟 ...

这个视频应该是多年以前的了，操作太复杂。在周期分析中，乙醇的作用不仅是破膜，更重要的作用是把DNA从组蛋白中沉淀出来，以便PI充分嵌入。

niwanmao

tiger 发表于 2021-2-24 15:51
这个视频应该是多年以前的了，操作太复杂。在周期分析中，乙醇的作用不仅是破膜，更重要的作用是把DNA从组 ...

感谢您的补充。

视频我看上面的发布日期是2020年10月份的。
乙醇对提取出来的核酸是有沉淀作用，不过我个人的理解是，乙醇作用在完整细胞上，应该主要是破膜和「蛋白质变性使核酸染料易于结合DNA双螺旋结构」。

刚刚刚

乙醇处理之后会有很多像絮状物类似的东西贴在管壁上，按1500rpm*5min，依然离心不下去。这时候用枪去吸走上清，会把一部分这个东西吸走，这一部分是DNA吗？弃走对后续染色的结果影响大不大呀？

tiger

刚刚刚 发表于 2021-2-25 18:21
乙醇处理之后会有很多像絮状物类似的东西贴在管壁上，按1500rpm*5min，依然离心不下去。这时候用枪去吸走上 ...

给你提个建议：固定细胞可以这样操作，先0.3ml PBS悬浮细胞，把悬浮好的细胞用移液器加到0.7ml 无水乙醇中，快速混合，置-20过夜。取出离心弃酒精前，先混匀。

刚刚刚

tiger 发表于 2021-2-26 16:37
给你提个建议：固定细胞可以这样操作，先0.3ml PBS悬浮细胞，把悬浮好的细胞用移液器加到0.7ml 无水乙醇 ...

多谢！！

lulixian669

niwanmao 发表于 2021-2-24 08:55
这个15分钟，如果操作得当，也是染的出来的，乙醇的破膜能力还是不错的。但是保险起见，4度24小时，当然 ...

谢倪老师，因为之前做的时候都是用的隔夜，效果挺好，就是想着能节约时间，看来还是保证效果优先。

MMZ

刚刚刚 发表于 2021-2-27 21:46
多谢！！

问下你用了这种固定的方法了吗？