使用PMA刺激小鼠细胞6小时后检测流式，CD44和CD95没有表达？

缘yuan

请教老师们，为什么Ba/b/c1小鼠细胞检测CD44和CD95没有表达？

niwanmao

你的染色步骤？是否经过了固定？

缘yuan

niwanmao 发表于 2021-3-31 14:14
你的染色步骤？是否经过了固定？

倪老师，这个是需要胞内染色的吗？这样可以检出？

缘yuan

缘yuan 发表于 2021-3-31 16:39
倪老师，这个是需要胞内染色的吗？这样可以检出？

我一直做的是表面染色，检不出来

niwanmao

缘yuan 发表于 2021-3-31 16:41
我一直做的是表面染色，检不出来

不是说胞内染色，我是担心你的步骤里面用到了固定剂或者含固定剂的裂解液等，影响结果。

缘yuan

niwanmao 发表于 2021-3-31 18:03
不是说胞内染色，我是担心你的步骤里面用到了固定剂或者含固定剂的裂解液等，影响结果。 ...

没有，我的裂解液没有固定剂的成分；我是先裂解红细胞再标抗体的；

niwanmao

缘yuan 发表于 2021-4-1 09:28
没有，我的裂解液没有固定剂的成分；我是先裂解红细胞再标抗体的；

先标记，再裂红。

多纳泰罗豪

niwanmao 发表于 2021-4-1 12:42
先标记，再裂红。

我们都是先裂红，封闭之后表染CD44 可以染上

niwanmao

多纳泰罗豪 发表于 2021-4-1 13:31
我们都是先裂红，封闭之后表染CD44 可以染上

不是说不可以，但在他们标记不上的时候，还是建议按照正常流程做。
正常流程，是应该先标记再裂解的，你可以看各种Protocol。

Fish形影单只

缘yuan 发表于 2021-4-1 09:28
没有，我的裂解液没有固定剂的成分；我是先裂解红细胞再标抗体的；

有些溶血素是带有固定剂的，例如临床常用的BD FACS Lysing solution  （349202）
，先裂红再标记就标不上了。