为什么刚消化下来的人胚胎干细胞上流式没有明显细胞群

果儿

大家好，请教个基本问题，最近做的人胚胎干细胞的流式实验遇到了个问题，刚刚消化下来的细胞1X10的5次方用来上流式，另一部分传代了。
问题：1、上流式的时候WT没有明显细胞群，碎片和死细胞占98%以上，转染了质粒后的有细胞群，但是只有10~20%，不知是什么原因？（注：传代的细胞状态很好，消化细胞的酶换了一个，结果一样没有细胞群，去年做过一次通透后染色，并没有出现这个问题）上传2张图片，请大家帮忙分析分析，多谢！

图1是去年2020年做的流式，细胞通透后染色流式分析，细胞群很明显。

注：图1是去年2020年做的流式，细胞通透后染色流式分析，细胞群很明显。

图2 是近期4月22号的流式，细胞转染了质粒，细胞是一样的，消化用的酶（新买的）和去年也是一样的，流式电 ...

注：图2 是近期4月22号的流式，细胞转染了质粒，细胞是一样的，消化用的酶（新买的）和去年也是一样的，流式电压也是一样的，也重新调了一下其他电压也没找到任何细胞群，后来消化用的酶做了稀释后再消化结果也是 一样

niwanmao

先确认仪器状态是否正常。优选质控微球确认，其次正常样本。

果儿

niwanmao 发表于 2021-4-24 21:21
先确认仪器状态是否正常。优选质控微球确认，其次正常样本。

倪老师，仪器应该是没有问题的，因为跑完这个细胞之后，又跑了一个人的原代细胞的实验就没有问题，细胞群很明显，而且结果也很好，所以怀疑是胚胎干细胞哪出了问题

niwanmao

果儿 发表于 2021-4-25 10:39
倪老师，仪器应该是没有问题的，因为跑完这个细胞之后，又跑了一个人的原代细胞的实验就没有问题，细胞群 ...

如确定仪器没问题，是只能在样本上找原因了。