流式后跑WB

zjcxchentian

做Treg，分化后的Treg进行FOXP3的染色，如果希望用上流式之后剩下的细胞来跑WB的一些信号通路，已经破核的细胞是否可以呢？

niwanmao

建议如果要做信号通路，还不如直接用流式染相关的信号通路蛋白，可直接得出单细胞水平的数据。
Western是群体平均的数据，与流式数据无法关联起来。
参考磷酸化蛋白流式专帖：https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-9222-1-1.html

zjcxchentian

niwanmao 发表于 2021-7-12 22:13
建议如果要做信号通路，还不如直接用流式染相关的信号通路蛋白，可直接得出单细胞水平的数据。
Western是群 ...

倪老师，有个问题还想咨询一下，我想看treg的磷酸化，因为我看文献里面磷酸化会有未刺激组，我前期是加了不同的东西去看它对于treg分化的影响的，我的未刺激组应该怎么设置，老师说她以前做磷酸化是细胞分选之后静置然后加刺激的，但是没做过分化后的，我是应该分化结束之后先把细胞静置一段时间再用CD3/CD28去激活同时设置不激活的未刺激组还是直接染就可以，我应该不能一开始设置未刺激组养几天吧，因为那样就没有treg分化出来了

niwanmao

zjcxchentian 发表于 2021-9-9 15:21
倪老师，有个问题还想咨询一下，我想看treg的磷酸化，因为我看文献里面磷酸化会有未刺激组，我前期是加了 ...

可用FMO对照啊。磷酸化抗体那个通道留空。

zjcxchentian

niwanmao 发表于 2021-9-9 21:03
可用FMO对照啊。磷酸化抗体那个通道留空。

用FMO作为未刺激组？

zjcxchentian

niwanmao 发表于 2021-9-9 21:03
可用FMO对照啊。磷酸化抗体那个通道留空。

倪老师，破核之后会的胞内蛋白还有非特异性结合吗？很奇怪的是我磷酸化的FMO和处理组位置是差不多的，调完补偿之后，看上去都像是有阳性群或者就是分群不明显，或者更右移C:\Users\恬\OneDrive\桌面\FOXP3-Layout.jpg

zjcxchentian

niwanmao 发表于 2021-9-9 21:03
可用FMO对照啊。磷酸化抗体那个通道留空。

不知道怎么传图片，点击图片让我填图片地址

zjcxchentian

niwanmao 发表于 2021-9-9 21:03
可用FMO对照啊。磷酸化抗体那个通道留空。

这是其中一个的图片

zjcxchentian

niwanmao 发表于 2021-9-9 21:03
可用FMO对照啊。磷酸化抗体那个通道留空。

左边是样本管，右边是FMO，下面蓝色的是FMO

niwanmao

zjcxchentian 发表于 2021-12-3 22:17
这是其中一个的图片

FCS文件压缩成zip文件传上来看看。回复的时候，要点击弹出框的「高级模式」，才能上传的。