抗体更换克隆号和批号需要做哪些变更

无知的牧羊人

公司项目在临床阶段。问一下各位老师，有关于目前sop中的临床级别的流式抗体需要替换成科研级别抗体。
请问：1.更换抗体需要做哪些验证行为来确保抗体替换后的有效性？
          2.来看哪几个指标来看呢？

谢谢

niwanmao

1、需要有阳性和阴性样本，保证抗体的灵敏度和特异度，进行临床抗体和科研抗体的比对。
2、比对指标包括：表达率、荧光强度。
另外，同时有必要做一下抗体滴定，确保最佳用量。

无知的牧羊人

niwanmao 发表于 2021-7-20 12:31
1、需要有阳性和阴性样本，保证抗体的灵敏度和特异度，进行临床抗体和科研抗体的比对。
2、比对指标包括： ...

倪老师，这个与临床级别的抗体对比，是否就是在做好了抗体滴定后，观察表达率的差异？
抗体的灵敏度和特异度又是用什么指标来衡量呢？
荧光强度如何衡量？
谢谢

niwanmao

无知的牧羊人 发表于 2021-7-21 08:46
倪老师，这个与临床级别的抗体对比，是否就是在做好了抗体滴定后，观察表达率的差异？
抗体的灵敏度和特 ...

灵敏度，一般是用纯阳性的样本，按梯度稀释到阴性样本中，形成不同浓度的样本，测试其最低检测限。
特异度，就是检验其在阴性样本中的阳性率。
荧光强度是直接读取数据中的Geomean.

无知的牧羊人

niwanmao 发表于 2021-7-21 17:21
灵敏度，一般是用纯阳性的样本，按梯度稀释到阴性样本中，形成不同浓度的样本，测试其最低检测限。
特异 ...

倪老师请问一下，那么荧光强度在多少比较合适呢？谢谢

niwanmao

无知的牧羊人 发表于 2021-7-22 10:37
倪老师请问一下，那么荧光强度在多少比较合适呢？谢谢

荧光强度是arbitrary unit，所以每台机器会有不一样的坐标，所以不能通用。