细胞周期应用

THY

各位大神，请教大家一下问题：我同时做了3种细胞株，都是相同的病毒进行敲减后的NC和KD之间的比较；镜下看细胞状态都挺好，同时进行细胞固定，70%的酒精4℃固定24h，BD的550825试剂染色15分钟，用BD的C6 plus上机，上机速度控制在150个细胞/s；收集细胞；但是为什么有的细胞株就是不出峰呢？图还特别难看；求各位大神指教；

THY

之前做，那两个不出峰的细胞是可以拟合出图形的，虽然不太典型，这不知道是哪里出了问题，上传一下之前做的周期，大家帮我参谋一下，被这些问题快折磨的不行了

niwanmao

你用的是Accuri，Accuri的数据在modfit上分析是存在兼容性问题。

我这边用其它第三方软件，进行缩放后可见，是有明显的G2/M峰的，只是要将PE-A和PE-H放大。不过在拟合模型上，也有个别数据拟合不出，所以只能通过自己在直方图上设门分析比例了。 这里有个问题是，你的细胞是二倍体的还是多倍体的？PE-A和PE-H散点图右上方感觉有点像拖尾。

THY

倪老师你好，我的细胞是人的细胞，应该是2倍体的；我同期做了3个细胞株，每种细胞分别有2组；有2种细胞就是不出峰；有什么问题是导致细胞不出峰的呢？

THY

niwanmao 发表于 2021-9-5 10:51
你用的是Accuri，Accuri的数据在modfit上分析是存在兼容性问题。

我这边用其它第三方软件，进行缩放后可见 ...

倪老师你好，我的细胞是人的细胞，应该是2倍体的；我同期做了3个细胞株，每种细胞分别有2组；有2种细胞就是不出峰；有什么问题是导致细胞不出峰的呢？

niwanmao

THY 发表于 2021-9-14 20:48
倪老师你好，我的细胞是人的细胞，应该是2倍体的；我同期做了3个细胞株，每种细胞分别有2组；有2种细胞 ...

峰是有的，你仔细看我前面给你的图，只是这个染色有问题，因为第2个峰应该是G2/M峰，但其后面的拖尾太明显了。所以你后续需要在标本处理上再下功夫。

wxd

看了一下你的文件，你应该是在分析KS和U937细胞时遇到问题，其中KS是可以拟合的，只是KS在分析时可能选错了细胞群，导致无法拟合。U937的峰比较诡异中间多了一个峰，看着像是其他细胞污染了。楼主应该不太熟悉细胞周期分析，建议每次做一种细胞。