T细胞检测CD3、CD4、CD8、CAR

汀雅

问题描述：我们在对control T细胞进行CD3、CD4、CD8、CAR检测时遇到假阳性问题。数据如下图所示：我们用protein L对control T进行标记，理论上并不会有表达，但出现了假阳性，为分析原因，设置了几种对照：同一样本分为以下几组：
1.标记CD3、CD4、CD8、protein L
2.标记CD3、CD4、protein L
3.标记CD3、CD8、protein L
4.标记CD3、protein L
5.标记protein L完成后清洗，再进行CD3、CD4、CD8的标记。
结果：除了标记CD3、CD4、CD8、protein L 的这一组有阳性，其他组均为阴性，有人遇到过类似的情况吗？请大家帮忙分析一下原因，谢谢！

niwanmao

1也是标记完之后，洗涤过，再上机？

汀雅

niwanmao 发表于 2022-3-16 18:14
1也是标记完之后，洗涤过，再上机？

1是将Protein L、CD3、CD4、CD8全部一起标记，4℃孵育30min后洗涤，然后重悬上机的。

niwanmao

汀雅 发表于 2022-3-18 09:08
1是将Protein L、CD3、CD4、CD8全部一起标记，4℃孵育30min后洗涤，然后重悬上机的。 ...

洗涤过，不应该会有如此明显的非特异性才对。不知道重复过几次？
或者是否将各通道两两组合的散点图全部放出来找找原因看。

Yuck

没遇到过你的问题。不过想问的你这是day几的数据，4/8还能保持一比一的数据。

汀雅

niwanmao 发表于 2022-3-18 09:20
洗涤过，不应该会有如此明显的非特异性才对。不知道重复过几次？
或者是否将各通道两两组合的散点图全部放 ...

1.洗涤是1次
2.我给Protein L阳性部分一个颜色去看CD4、CD8，发现Protein L阳性大部分为CD4阳性细胞，可是我的第二个组“标记CD3、CD4、protein L”中的Protein L确是阴性的，实在搞不懂了

niwanmao

汀雅 发表于 2022-3-23 09:33
1.洗涤是1次
2.我给Protein L阳性部分一个颜色去看CD4、CD8，发现Protein L阳性大部分为CD4阳性细胞，可是 ...

不同参数的散点图，分别放出来看一下，这样看来或许是补偿问题了。

汀雅

niwanmao 发表于 2022-3-23 11:15
不同参数的散点图，分别放出来看一下，这样看来或许是补偿问题了。

我感觉不像是补偿的问题

niwanmao

汀雅 发表于 2022-3-23 17:35
我感觉不像是补偿的问题

这样的话，建议重复多次，看看现象是否有可重复性还是偶发现象。

汀雅

niwanmao 发表于 2022-3-23 18:07
这样的话，建议重复多次，看看现象是否有可重复性还是偶发现象。

好的，谢谢老师！