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[其它] 请教下人红细胞染线粒体的问题

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发表于 2022-9-27 20:24:34 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏1流星未解决
老师们好,我目前实验是尝试用线粒体示踪剂(MitoTracker 货号: M7510)进行红细胞的染色,参考的是一篇文章中下列的做法For mitochondrial content in mature RBCs, PBMCs were removed from peripheral blood by density centrifugation using Lymphoprep™ (Stem Cell Technologies). The cell pellet was washed four times (3000 rpm, 8 min, 4°C) with PBS supplemented with 2 mM EDTA and 10 mM Glucose. The cell pellet was then re-suspended in PBS supplemented with 10 mM Glucose and MitoTracker Deep Red (MTDR, 200 nM; Thermo-Fisher) and incubated for 30 min at 37°C)。但是每次染完细胞都没有明显的分群,只有整体荧光强度略微的提高,难道是我的红细胞中真的都没有线粒体吗?附上原始文件,望各路大神解惑!

rbc.zip

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发表于 2022-9-27 21:08:04 | 显示全部楼层
成熟红细胞应该是没有线粒体的呀。

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 楼主| 发表于 2022-9-29 21:00:04 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2022-9-27 21:08
成熟红细胞应该是没有线粒体的呀。

老师好!可是我染的CD71+未成熟红细胞也染不上线粒体,我用PBMC尝试了一下就能染上,是红细胞的染色方法和PBMC不一样吗?
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 楼主| 发表于 2022-9-29 21:01:07 | 显示全部楼层
chenzeze 发表于 2022-9-29 21:00
老师好!可是我染的CD71+未成熟红细胞也染不上线粒体,我用PBMC尝试了一下就能染上,是红细胞的染色方法 ...

红细胞染线粒体的方法我目前也只找到这一篇文章有提及
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发表于 2022-9-30 13:38:04 | 显示全部楼层
chenzeze 发表于 2022-9-29 21:00
老师好!可是我染的CD71+未成熟红细胞也染不上线粒体,我用PBMC尝试了一下就能染上,是红细胞的染色方法 ...

CD71并不是区分成熟和未成熟的标记。
CD36+GlyA可以比较好的分出各个阶段。
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