嗜酸性粒细胞加细胞因子培养24h后blank出现分群

耳鼻喉周爱娜

我从外周血分选的嗜酸性粒细胞（磁珠阴性分选---Miltenyi Biotec:Eosinophil Isolation Kithuman 130-092-010，纯度85-90%，24h后纯度99-100%，瑞氏染色确定）,C1640+GM-CSF 条件下培养24h或48h，做blank会出现分群，FL1-FITC/FL2-PE/FL3-7AAD都会有（和样本管类似的分群）。查过一些文献后发现嗜酸性粒细胞的自发荧光比较强，不知道这里blank的问题是不是自发荧光造成的，如果确实是自发荧光，那如何解决呢？我想分析不同培养条件下CD40-PE-FL2 的表达变化，直接不管blank可以吗？

blank管在FL2，FL3均出现分群

实验组染FL3-7AAD

实验组染FL2-CD40

对不同组别直接圈右边那一群进行分析

niwanmao

看一下阳性这群，在FSC/SSC图上，是否位于凋亡区域？

耳鼻喉周爱娜

niwanmao 发表于 2022-9-28 13:02
看一下阳性这群，在FSC/SSC图上，是否位于凋亡区域？

我帖子中的R5，R6都是来自于R1的。
然后我又分析了一下，发现是这样的。（内容在我的第2篇帖子中）

耳鼻喉周爱娜

blank在FL2-PE通道下的分析策略

我又分析了下，发现从FSC/SSC来源的细胞，偏右下角的是FL2阴性的，而左上的一大群在FL2上有阴有阳。

如果直接分析FL2来源，发现差不多结果。

niwanmao

耳鼻喉周爱娜 发表于 2022-9-28 17:32
我帖子中的R5，R6都是来自于R1的。
然后我又分析了一下，发现是这样的。（内容在我的第2篇帖子中） ...

首先，请以后同一主题发新内容，用跟帖的形式进行，回帖时进行「高级模式」可以上传图片。不要发新帖。这次先帮你取消悬赏合并到一起了。

其次，上面图已经很明显，这些阳性群都是假阳性，只要你在FSC/SSC散点图上选择右侧的正常细胞群即可。左侧为凋亡细胞。

nikeyia10

再次印证在FSC/SSC图中左边那一群是凋亡细胞