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悬赏5流星未解决
本帖最后由 wangyufei517 于 2022-10-4 10:55 编辑
如下图,我尝试过几次CFSE的染色,总是不成功,明明在镜下看到有好多聚集的细胞团,但是上机之后就检测不到CFSE的变化,球球各路大神指点一下
我用的方法是参考了之前倪老哥分享的步骤做的。
1.用0.1%BSA制备脾脏单细胞悬液,包括裂红
2.取1×10^7细胞用1ml 0.1%BSA重悬后加入1μl 2.5mM CFSE,37℃染色10min,5倍体积预冷含10%FBS 1640培养基冰上静置5min
3.离心后再用10%FBS 1640培养基洗两遍
4.前一天晚上用200μl 2μg/ml anti-CD3包被,37℃过夜
5.脾细胞按2×10^5 cells/well铺板,co-culture组加入1×10^5 cells/well,补齐培养基到200μl,加入2μg/ml anti-CD28
6.37℃培养3天上机检测
救救孩子吧
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