求问BMDM处理方法

WZNan

刚开始做小鼠BMDM的活细胞染色（线粒体膜电位TMRM、线粒体氧化应激MitoSOX），发觉经诱导7天再刺激两天后的细胞很难消化下来，又怕强行消化或吹打改变活细胞状态，想请教有经验的朋友，这种单细胞悬液怎么制备比较好呢？谢谢！

niwanmao

可以参考这个Protocol《Preparation and culture of bone marrow-derived macrophages from mice for functional analysis》里面的步骤：
刺激后，用PBS清洗细胞两次，并吸出。
加入0.05%胰蛋白酶-EDTA（12孔板约100μL/孔），在37℃下孵育3分钟。加入DMEM（10%FBS，12孔板为1毫升/孔），用细胞刮刀将细胞刮出，并转移到5毫升圆底管中。
在200×g，4°C下离心3分钟。
将细胞悬浮在1mL FACS缓冲液中进行计数，并进行后续分析。

另外，我觉得如果实在担心消化会影响，那么可以直接染色后，用荧光显微镜观察。

WZNan

niwanmao 发表于 2022-11-6 14:14
可以参考这个Protocol《Preparation and culture of bone marrow-derived macrophages from mice for funct ...

谢谢倪老师！
总觉得荧光显微镜没有流式直观