BD FACSdiva里的threshold rate与什么有关

瓜瓜999

我提取的是心脏免疫细胞，染色固定。我们发现心脏免疫细胞非常非常少，所以决定每次都几乎尽可能测完整个样本。
例如同时准备了5个样本，上机测发现threshold rate并不一样。有的样本在12000 evt/s左右，有的在5000或8000左右，因此如果样本的threshold rate低，测量时间相对就久。

想问一下threshold rate是和哪些方面有关系呢，样本的准备或者其他原因？
非常感谢~

threshold rate

wxd

流式细胞仪在检测样品时，为了排除如细胞碎片，杂质等的干扰，通常会在某一个检测通道（一般是FSC-H通道）设置一个标准，称为阈值（Threshhold），低于这个阈值强度的信号不会被记录或者统计。Threshold Rate指的是在阈值之上（可记录/统计）的细胞的上样速率。
至于不同样品之间Threshold Rate的不同，并且Threshold Rate低的上样时间长，如果你的上样体积基本一致，仪器设置的上样速率一样的话，这个现象可能是样品给药处理以及单细胞制备等过程中操作差异导致的细胞浓度不一致和细胞数量不一致，也可能是某些样品没处理好，杂质比较多，把上样针堵了。

瓜瓜999

wxd 发表于 2023-11-24 13:57
流式细胞仪在检测样品时，为了排除如细胞碎片，杂质等的干扰，通常会在某一个检测通道（一般是FSC-H通道） ...

上样体积和其他的设置都是一样的，就是测的时候threshold rate不一样。非常感谢您的回复

lkpo456

感觉是不是有细胞破裂或者黏连了光路识别错误了

瓜瓜999

lkpo456 发表于 2023-11-29 14:31
感觉是不是有细胞破裂或者黏连了光路识别错误了

我分析心脏和肿瘤的免疫细胞。肿瘤我用了percoll，心脏我没有用（只是机械+酶消化）。上机前我用流式管过滤时发现一般心脏sample过滤相对比较慢，可能样品里黏连了