流式阴性对照的选择

qingxiangbohe

请问各位大侠，流式实验时，阴性对照是否一般是用同型对照？但有一次用同型做对照，结果导致后面抗体染色阳性率非常低，远低于正常的水平，后来听有人说用裸细胞做对照，发现阳性率就达到了文献上说的水平。我想请教这是什么原因呢？

niwanmao

qingxiangbohe 发表于 2011-9-30 14:42

                               
登录/注册后可看大图

请问各位大侠，流式实验时，阴性对照是否一般是用同型对照？但有一次用同型做对照，结果导致后面抗体染色阳 ...

同型对照的概念：跟抗体相同来源、相同亚型（即可能是IgG1或IgG2等等），主要用于排除抗体的本底。
阴性对照的概念：不表达该标记的细胞。
空白对照的概念：不加抗体的细胞。

按照正规做法，空白对照一般可以不设；阴性对照受条件限制，有些标记可能找不到合适的阴性对照；同型对照最好要做。
至于你提到的同型对照有时候偏高的现象，是有，但比较少见，我估计可能的原因有：不是同一个公司；同型对照非特异性结合过高；抗体的质量问题。只能逐个排除了。