请教各位胞内染色步骤如何优化

司徒随风

第一种方法是不是可以做个室温稳定性看看，如果样本室温放置一晚检测结果与现采样本数据满足检测需求，是可以用于后续检测的。

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司徒随风 发表于 2024-4-2 17:02
第一种方法是不是可以做个室温稳定性看看，如果样本室温放置一晚检测结果与现采样本数据满足检测需求，是可 ...

那我可以在裂红结束之后测一下用台盼蓝测一下细胞活性和数量吗？

句号

如果是裂红来做，把血放第二天做可能会更好，不过核内的指标提PBMC来做可能会更好一点，我自己做的指标是核内的，就是发现核内的指标染色很容易发生移动，而且固定过后细胞量的丢失蛮大的，裂红做出来的效果不太好。我自己摸出来的就是提PBMC（最后洗涤的时候用BD的裂红1次，根据提出来的沉淀看裂红液使用量）-死活-封闭-表染-固定，固定30min（看固定剂，有的固定剂是可以过夜的，但是最好是固定30分钟后换到缓冲液中过夜），因为我是临床上的血，收样时间不定，为了控制变量，都是固定后8小时再继续破膜、胞染、上机。另外就是做抗体滴定，特别是胞染的那个抗体，做完抗体滴定和FC block封闭后胞群移动得到了明显的改善，你可以试试看

司徒随风

用户被占用 发表于 2024-4-2 17:19
那我可以在裂红结束之后测一下用台盼蓝测一下细胞活性和数量吗？

外周血稳定性：至少三个不同个体，外周血样本采集后，于实际条件放置，实际所需时间之后，按正常检测流程操作，与采集后立即进行检测的样本样本比较考察外周血样本稳定性，如您就需要看（IL-4、IL-17、IFN-y、IL-10、IL-21）等指标的阳性率（您检测目的是什么就看什么）如果两次的CV不大就可以认为您这么操作没有问题。

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句号 发表于 2024-4-3 09:12
如果是裂红来做，把血放第二天做可能会更好，不过核内的指标提PBMC来做可能会更好一点，我自己做的指标是核 ...

好的，学到了，感谢分享~

用户被占用

司徒随风 发表于 2024-4-3 15:17
外周血稳定性：至少三个不同个体，外周血样本采集后，于实际条件放置，实际所需时间之后，按正常检测流程 ...

好的，谢谢啦