大鼠th1/th2/th17/treg比例的检测中，IL 17A 和IFNγ不表达

giamay

之前在论坛里面发过类似的帖子，现在已经开始做了，遇到了更加具体的问题，具体设计如下：
大鼠的外周血的th1/th2/th17/treg比例的检测
1. 空白管；
2.CD4+-FITC/CD 25+-APC/Foxp3-PE；
3.CD 4+-FITC/IL4-PE/IL 17A-pecy7 /IFn- γ-ALEXA 647；
4.所对应抗体的同型对照管（共有五个，共一管）
预实验中，FOXP3出来的结果还好，表达也不错，后面上图。但是，什么都有个但是，IL17A-PEC7和IFNγ ALEXA 647基本不表达， IL4-PE少量表达。
流式老师说，应该是刺激阻断剂的问题，我刺激阻断剂买的是Cell Stimulation Cocktail (plus protein transport inhibitors) (500X)，100ul的体系加0.02ul。和试剂公司交流，试剂公司说试剂绝逼没有问题。IL17是EB的，IFNγ和IL4是BD的。cocktail是EB的。破膜固定用的是EB的Foxp3 / Transcription Factor Staining Buffer Set Kit，胞内的也用的这个破膜固定。

giamay

请问各位，除了刺激阻断剂的问题，还有什么其他可能引起这个结果的，抗体或者，破膜固定剂等等？？

niwanmao

从FSC/SSC看，细胞状态不好嘛。
还有，为什么foxP3和IL-4在分析图上显示在一起，不知道你分析的到底是foxP3还是IL-4？

giamay

niwanmao 发表于 2015-5-19 20:10
从FSC/SSC看，细胞状态不好嘛。
还有，为什么foxP3和IL-4在分析图上显示在一起，不知道你分析的到底是foxP3 ...

因为是两管同时测，foxP3（是宁外一管单独测的）和IL 4都是PE，所以就写在一起，这个图里面只有IL4 ，foxP3 的图没有贴上来。倪老师，IL17A和IFNγ没有表达出来的原因可能有哪些？