Monocyte-derived dendritic cells/macrophge的制备及贴壁

hbezyr

在文献中看到的操作一般如下：

1. isolate PBMC from blood

2.enrich monocytes by PBMC adhere plate

3.add GM-CSF and IL-4 for 3-7 days

我的问题主要是集中在第2和3点上。

1. 如何富集？

我用过fresh和冻存的PBMC，然后放在6孔板上进行2h或是过夜静置，但是没有太多的monocytes贴壁。

一般有人说是PBMC的10%是monocytes。我做过计算，贴壁的数量极少，变异极大。

想问下，做这个实验，最好用哪个牌子的平板？

在进行富集的操作，静置和用PBS冲洗的操作？

贴壁的PBMC到底有多少？

2.我尝试过先分行出CD14阳性的细胞，然后再加GM-CSF培养，3到7天后，细胞整体仍没有多少贴壁的。

3.我在后期的实验操作中，要求细胞贴壁比较好。

niwanmao

你这三个问题总结一下就是没法贴壁，我在想，是不是培养基的问题？
BD有一个制备单核来源树突细胞的Protocol，看看是否有帮助（在线阅读，支持划词翻译）：
https://www.flowcyto.cn/bbs/forum.php?mod=attachment&aid=OTE5M3xhNjJlNGU2MnwxNzE2NDI2Mzg4fDB8