请大家帮我看看间标结果

史瑞克莱

新人发帖，有不到之处请大家海涵，新开始做流式，很多地方不清楚，请大家不吝赐教。
背景：以前没有做过流式间标，为测试体系和抗体是否工作，选用阳性细胞系HepG2，一抗为细胞表面抗原CDH1，二抗为对应种属的488标记荧光二抗，一抗二抗用量皆为1ug，红色柱子为阴性对照（仅孵育二抗），蓝色柱子为4℃下孵育的抗体，橙色柱子为室温下孵育的抗体。
问题：
1。不同温度下孵育结果相差不大，但与阴性对照组相比阳性样品仅能看出峰移，二分门统计也就25%阳性率，这是抗体的问题还是手法的问题，还是设置不当的问题呢？
2.用 FlowJO打开原始数据提示有45%的事件在坐标轴上（右侧），我细分了下，发现大部分都是FSC坐标轴右侧上。因为技术员在使用阴性样品调试电压时为了美观似乎有意在FL1通道将阴性峰图右移，所以我想是不是影响到了FSC通道的数据采集，导致大量事件超出了上限，打在了坐标轴上
3。反映在荧光通道上，就是下图最右侧有个小峰，这个又该怎么理解呢？

史瑞克莱

{:soso__3669389859068460655_4:}欢迎指教啊

史瑞克莱

貌似我击中了一个盲区{:soso__3669389859068460655_4:}

史瑞克莱

落笔翘首盼心急，门前冷落鞍马稀

niwanmao

1、首先确认一抗和二抗的种类选择都正确，染色时间也没问题，那么还是需要考虑抗体问题，不知道是否进行了滴定？不存在手法不手法的问题。
2、FL1的电压不会影响到FSC，你需要看你的仪器是什么机器，在机器的自带软件上显示是否正确，如果机器上显示正确，那么需要考虑数据文件的兼容性问题，如果机器上也不正确，那就是FSC电压偏大。
3、右侧小峰属于噪音信号。