请教 荧光蛋白 激发波长与发射波长的基础

lysfes

各位老师好，我实验室新入手流式细胞仪一台，我基础较为薄弱，一些理论知识比较空白。
今天诚心向各位老师请教，望不吝解答！


现有流式细胞仪一台，BD Facsverse

蓝激光：488nm；通道，FSC、SSC、FITC、PE、PE-Cy5、PE-Cy7

红激光：640nm；通道，APC、APC-Cy7

我们在做实验时有个情况，

如：MitoScene Red CMXRos，Ex/Em = 579/599nm实际上，我们用488激发后，在PE（565-607）是能检测得到信号的。


为此，我感到疑惑，对于荧光素的激发和发射有以下几个提问：
1.为何Ex=579的荧光素，能够被488的蓝激光激发？
2.Ex=450的或者更低的能否被488激光激发？
3.Ex是指最佳激发波长吗？那实际激发波长可以是一个范围值吗？
4.这种范围值是怎么确定的，有无参考的资料？


请各位老师、同行不吝赐教！

niwanmao

你第三点理解对的，就是这句话可以解释你的疑惑。
至于450一般激发不了。
范围，可以参考荧光素特性，但是一般每个厂家（例如BD、Biolgend）的spectrum viewer可以查看。

lysfes

niwanmao 发表于 2020-1-17 18:40
你第三点理解对的，就是这句话可以解释你的疑惑。
至于450一般激发不了。
范围，可以参考荧光素特性，但是 ...

谢谢倪老师，春节快乐!