syto24和PI双染判定细菌死活如何调补偿？

king89th · 发表于 2020-1-16 09:36:44

头一次用流式细胞仪，没有任何基础，看了很多帖子现在处于似懂非懂状态：

我们是参照ISO 19344-2015中的protocol B做试验，目的是分辨和计数益生菌菌剂中活菌和死菌数量。
染色剂是syto 24和PI，syto 24是膜穿透染料，活死细菌均能染色，激发波长515nm，绿光，FL1接收；PI不能透膜，只能染死细菌，激发波长620nm，红光，FL3接收，且死菌染上PI后能减少syto 24的激发；但如果是“半死不活”的细胞，PI染料较少的话，红光、绿光都有。

我们做了空白对照，不染色的活细菌、死细菌
单染，syto 24染的新鲜活细菌、PI染的煮死的细菌
双染，将活细菌死细菌混合，同时染syto 24和PI
我们是在BD 的C6仪器上做的。
做完用flowjo分析：

不知道补偿是否做的有问题？

但补偿应用于所有样品后，打开样品管，发现上面说大部分细胞都在坐标轴上，这是说大部分都没染上吗？

刚刚看了倪老师的回帖，我做了一下MFI，选择中位数，发现空白管和单染管的中位数差距很大，这是补偿调错了吗？

谢谢大家！