两个单阳管都是阴性

chunfeng

用Annexin V-APC, PI 检测肿瘤细胞凋亡.遇到几个问题想请教大家。

1.APC,PI 的单阳管都是阴性，阳性信号都很弱。后来我用药物处理过的细胞又做了两个单阳管，这下就能区分开了。第一次没区分开应该是细胞本身凋亡和坏死的就少。请问我需要人为制造凋亡，比如uv照射、加PMA之类，从而保证单阳管内有足够多的凋亡细胞吗？

2. APC 和PI 理论上不需要补偿。但是我上PI单阳管时候发现APC通道也有信号， 降低apc电压后没有了。但是APC单阳管里就没有PI信号。请问这种情况正常吗？以及可能的原因是什么？

3. 我APC单阳一开始用的beads，但是preview的时候连events都没几个。是孵育时间太短了吗，还是可能beads批号和机器里beads文件不相符？

niwanmao

1、单阳管是需要人为制造凋亡的，但是调过一次，应该就可以了，不一定每次都做。
2、PI由于激发和发射光范围大，所以是有一定的可能性漏到APC通道，这跟机器的光路设计也有关系，做好spillover 调整即可。
3、beads不建议替代细胞调节补偿，建议用单阳性细胞调节。

chunfeng

niwanmao 发表于 2020-9-20 09:48
1、单阳管是需要人为制造凋亡的，但是调过一次，应该就可以了，不一定每次都做。
2、PI由于激发和发射光范 ...

谢谢倪老师