植物细胞周期分析

waterbingp

各位老师好。这个是我第一次用流式做的植物细胞DNA含量图，有一些不明白的地方，还望老师给予指点
1、FSC-SSC点图中，哪一些是细胞，哪一些是杂质，怎样区分呢？
2、FL2W-FL2A点图中，为什么有些点是红色的，有些是绿色或者蓝色的？我的这个图是否可信
3、以上的两个点图中，我设的门对不对？
4、FL2A的直方图中，我做出来的曲线不够平滑，有很多锯齿，为什么？是不是材料制备方面出现的问题。
我在我们实验室是第一个用流式细胞仪的，没有老师会这个。都是我自己琢磨，有很多问题问的都很弱，还望各位老师海涵。

niwanmao

waterbingp 发表于 2011-4-9 10:32

                               
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各位老师好。这个是我第一次用流式做的植物细胞DNA含量图，有一些不明白的地方，还望老师给予指点
1、FSC-S ...

不知你的处理步骤是否正确，权威的详细protocol见：http://www.flowcyto.cn/bbs/forum.php?mod=viewthread&tid=73

1、植物细胞一般比较小，R1门内应该算细胞。我们平时区分细胞还是碎片是首先要熟悉正常情况下细胞的位置之后，再来判断的；如果在10E1附近出现了大堆信号，而调节电压对这堆信号影响不大，那么就可以判断其为碎片或非特异信号的可能性大。
2、颜色是MODFIT中用来区分细胞密度的，按照红、橙、黄、绿、青、蓝、紫的顺序，提示细胞越来越密。
3、R1门对，R2门不正确，R2门的FL2-A最右侧应该调节到90以内。
4、这个不平滑的曲线是正常的细胞分布，拟合之后，才会出现光滑的拟合曲线。但看你的拟合，似乎不正确。按照PROTOCOL中所述，你应该选择鸡红细胞或已知倍体的植物细胞作为倍体对照，然后方能设置出细胞倍体位置，最后进行曲线拟合。

waterbingp

谢谢倪老师的回答

waterbingp

还有一个问题不明白，Aggregates、Modeled events、All cycle events、Cycle events per channel分别是什么意思呀？

niwanmao

waterbingp 发表于 2011-4-11 10:11

                               
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还有一个问题不明白，Aggregates、Modeled events、All cycle events、Cycle events per channel分别是什么 ...

Debris和Aggregates分别指细胞碎片和细胞粘连体的比例，是反映我们标本质量的两个指标，所谓细胞粘连体是指两个细胞粘在一起，属于假性多倍体，可以通过FL2-A/FL2-W的设门排除。
其它三个指标是MODFIT进行曲线拟合的一些技术指标，我们不需要看，最重要的是RCS和CV等值。

waterbingp

哦，太谢谢了倪老师了