流式实验每次都要做同型对照和FMO对照吗

niwanmao

无知的牧羊人 发表于 2021-4-29 08:27
好的。那一般来说 是 iso在合理范围内，就可以直接读数据就行了吧

严格匹配的isotype可做设门参照，但是实际很难找到。一般建议用生物学阴性对照或FMO对照。
设门的时候，将对照的比例尽量保证在1％以内，偶可放宽到2％，但是要求是无拖尾的分布。

无知的牧羊人

niwanmao 发表于 2021-4-29 08:32
严格匹配的isotype可做设门参照，但是实际很难找到。一般建议用生物学阴性对照或FMO对照。
设门的时候， ...

好的 谢谢老师

liuruiluna

Yooooo 发表于 2021-4-22 08:50
我当时询问技术，技术说同型也就相当于阴性对照了，然后，做了同型就没必要再做空白了。感谢老师制作，我 ...

我认为这个说法是不对的，如果不做空白，就无法对照出同型对照到底有没有非特异性结合，不做空白管，如何知道isotype有还是没有非特异性？两者不可互相替代。理想状态中isotype与空白管跑出来一样，说明没有非特异性结合，一般isotype有一点点非特异性信号的话，就可以作为阴性细胞的参照位置，如果比较之后，发现isotype背景很强的话，可以采取用样本管减掉isotype，或者可以用FMO作为参照。所以具体情况具体分析，要看跑出来什么情况

闷油瓶

niwanmao 发表于 2021-4-29 08:32
严格匹配的isotype可做设门参照，但是实际很难找到。一般建议用生物学阴性对照或FMO对照。
设门的时候， ...

老师，我们是每次检测的细胞种类相同，所以一直都是用的一个模板，模板包括测同型对照和样品。如果测同型对照时候，读数超过了百分之二，那该怎么办呢？是不是得重新调电压，然后用单染调新电压下的补偿，然后才能测？

闷油瓶

liuruiluna 发表于 2021-4-29 17:09
我认为这个说法是不对的，如果不做空白，就无法对照出同型对照到底有没有非特异性结合，不做空白管，如何 ...

“如果比较之后，发现isotype背景很强的话，可以采取用样本管减掉isotype”这句话怎么理解？用两个百分比相减吗？怎么体现在报告上？测完分析的时候，我直接拖拽门，让同型对照的那些背景荧光都跑到门外面，这样设门可以吗？

liuruiluna

闷油瓶 发表于 2021-5-11 20:20
“如果比较之后，发现isotype背景很强的话，可以采取用样本管减掉isotype”这句话怎么理解？用两个百分比 ...

可能具体要看高到什么程度，如果通过门能分开 就不用减

闷油瓶

liuruiluna 发表于 2021-5-12 15:01
可能具体要看高到什么程度，如果通过门能分开 就不用减

我们都是通过直方图来呈现各个抗原的百分比的，所以同型也都是直方图的形式呈现的，如果特别大的话估计得减，要不就得重新设模板了（重新设模板的话估计得用同型对照调一下电压，把阳性值都调到阴性区域，然后得重新调各个通道的补偿，不知道这样操作是否合理）

niwanmao

闷油瓶 发表于 2021-5-12 16:16
我们都是通过直方图来呈现各个抗原的百分比的，所以同型也都是直方图的形式呈现的，如果特别大的话估计得 ...

如果不建议用isotype作为设门参照，而是建议用生物学阴性对照或FMO对照。
其次，如果阴性对照或FMO对照比例很高，这说明做的有问题或细胞死的比较多。

闷油瓶

niwanmao 发表于 2021-5-12 20:36
如果不建议用isotype作为设门参照，而是建议用生物学阴性对照或FMO对照。
其次，如果阴性对照或FMO对照比 ...

我们这是大批量检测，所以用生物学阴性对照不太现实，而且我们是双色的，所以用FMO对照的话就相当于我们的单染了吧？我们只是以前用单染调过补偿，大多数标本都没事，偶尔有几个同型对照测出来高的，不知道这样的是否得重新调一下电压重新测

niwanmao

闷油瓶 发表于 2021-5-13 17:38
我们这是大批量检测，所以用生物学阴性对照不太现实，而且我们是双色的，所以用FMO对照的话就相当于我们 ...

大批量检测与生物学阴性对照是否能用不冲突。我们在临床上有时候几十几百个样本做的多的是。生物学阴性对照的概念我估计你误解了。